[发明专利]一种甲状腺过氧化物酶抗体磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及免疫分析医学领域，具体的，本发明提供了一种甲状腺过氧化物酶抗体(TPO-Ab)磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法。 

背景技术

甲状腺过氧化物酶(TPO)是催化甲状腺激素的重要酶。TPO由甲状腺滤泡细胞合成，它是由933个氨基酸残基组成的分子量为103kD的10％糖化的血色素样蛋白质，在滤泡腔面的微绒毛处分布最为丰富。甲状腺过氧化物酶抗体(TPO-Ab)是甲状腺自身抗体的一种，TPO-Ab作为甲状腺疾病的主要自身抗体可引起甲状腺滤泡损伤，导致甲状腺功能减退。临床上对TPO-Ab进行检测，有助于对原发和继发甲减进行鉴别，且在自身免疫性甲状腺疾病(如有桥本甲状腺炎、Graves病)的鉴别和诊断中具有重要的临床意义。通过检测TPO-Ab可以提高对AITD的诊断率，具有重要的参考价值。 

目前，临床领域应用的TPO-Ab检测方法主要有放射免疫法、酶联免疫测定法和化学发光免疫测定法等。 

酶联免疫测定法具备其操作简单、试剂有效期长无污染、特异性好、结果可用仪器测定等特点得以推广，但由于敏感性相对较低，所用标记酶与底物可定量测定范围窄，及仪器测定范围窄等缺点，限制了其在微量免疫定量测定中的应用。 

化学发光免疫测定研究起步于80年代初，快速发展应用于90年代，具有高灵敏度、高特异性，操作简便、快速，标记结合物稳定，同时无放射性同位素损伤和污染等特点，因此近年来在临床检测分析中被广泛推广使用。 

发明内容

本发明要解决的问题是提供TPO-Ab的化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法，避免了测值重复性差，酶联免疫法灵敏度低，检测范围窄，无全自动化操作等缺陷。 

本发明采用的技术方案是：TPO-Ab磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，包括：TPO-Ab校准品；偶联有链霉亲和素的磁微粒悬浮液；生物素标记的TPO-Ab；鼠抗人抗体酶结合物，所用的酶为辣根过氧化物酶，辣根过氧化物酶纯度RZ≥3.0，活性≥250U/mL；TPO-Ab质控品，质控品包括浓度18IU/mL的低值质控品和350IU/mL的高值质控品；化学发光液A液和B液，A液为5mmol/L，pH8.6的Tris-HCl缓冲液，且该缓冲液中含有终浓度0.7g/L鲁米诺和终浓度0.165g/L对碘酚；B液为0.675g/L过氧化脲；20倍浓缩洗液；反应管。 

进一步，所述的磁微粒是表面包裹带有氨基或羧基活性基团的四氧化三铁，粒径100-500nm。 

进一步，所述的反应管的材料是透明聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯或玻璃。 

试剂盒的制备方法，包括以下步骤： 

(1)TPO-Ab校准品的配制： 

将TPO-Ab用校准品稀释液配置成校准品浓储液，所述校准品稀释液是用含1％BSA的磷酸盐缓冲液配制而成，以企业校准品进行定标，将浓储液用校准品稀释液稀释至工作浓度，分别为0，10，25，100，200，500IU/mL； 

(2)TPO-Ab质控品的配制： 

用校准品稀释液将上述浓储液稀释至18IU/mL和350IU/mL，18IU/mL为低值质控，350IU/mL为高值质控； 

(4)生物素标记的TPO-Ab的制备 

取0.5mg TPO抗原，用硼酸盐缓冲液在2～8℃下透析1～3h；将透析后的抗原加入45ug生物素，同时加入二甲基亚砜，使二甲基亚砜最终浓度为5-10％，缓慢振荡，避光反应3h；在上述溶液中加入300uL1M氯化铵溶液，常温避光反应2h；用0.01M PBS溶液在2～8℃下透析24h，期间换液2-4次； 

(5)鼠抗人酶结合物的制备 

采用改良高碘酸钠氧化法将鼠抗人抗体与辣根过氧化物酶进行偶联后，用酶稀释液(含12％BSA，0.5‰胭脂红，9g/L NaCl，1g/LDextran T-2000，1.1g/L Tween-20，1‰ProClin00)将其稀释至工作浓度1:5000，并加入8％酶稳定剂，储存于2～8℃； 

(6)20倍浓缩洗液的配制 

20倍浓缩洗液包括58g/L磷酸氢二钠，5.92g/L磷酸二氢钠，180g/L NaCl，10mL/LTween-20和2％Proclin300； 

(7)化学发光液A液和B液的配制 

A液为0.7g/L鲁米诺，0.165g/L对碘酚，缓冲液为pH8.6的5mmol/L Tris-HCl，避光保存；B液为0.675g/L过氧化脲，用工艺用水配制；