[发明专利]鸭瘟病毒UL15基因exonI重组蛋白及其制备方法和应用

权利要求书

1.鸭瘟病毒UL15基因 exonI重组蛋白，其特征在于：所述鸭瘟病毒UL15基因 exonI重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。

2.根据权利要求1所述的鸭瘟病毒UL15基因 exonI重组蛋白，其特征在于：编码所述鸭瘟病毒UL15基因 exonI重组蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

3.权利要求1或2所述鸭瘟病毒UL15基因 exonI重组蛋白的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将含有重组表达载体的大肠杆菌Rossetta在含有Amp的LB液体培养基中培养过夜，然后取菌液按体积比为1：50~1：100接入含Amp的LB液体培养基中，培养至OD600为0.4~0.6时，加入IPTG至终浓度为0.2~1.2 mmol/L，在温度为25~37℃条件下诱导培养2~6小时，收集培养菌液，培养菌液中含有鸭瘟病毒UL15基因 exon I重组蛋白；

所述重组表达载体为将SEQ ID NO.3所示核酸序列通过BamHI和XhoI连接原核表达质粒pPAL7而得。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述IPTG的终浓度为0.2 mmol/L。

5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：诱导培养为在37℃条件下诱导培养4小时。

6.根据权利要求3-5任一项所述的制备方法，其特征在于：诱导培养后还包括纯化步骤，

将诱导表达的菌液离心，收集菌体，菌体用pH8.0的20mmolTris-HCl悬浮；置-20℃过夜后按1mg/mL加溶菌酶，4℃搅拌30min，冰浴下超声波间歇破碎菌体，然后离心收集包涵体，收集的包涵体用含10mmol/L PBS、2mol/L尿素和质量分数为0.2%的Triton X-100的洗液重复洗涤5-10次，洗涤后离心收集沉淀，最后沉淀用含10mmol/L PBS和8mol/L尿素溶液溶解沉淀；得纯化的鸭瘟病毒UL15基因 exonI重组蛋白。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，纯化后还包括复性步骤：将纯化好的鸭瘟病毒UL15基因 exonI重组蛋白加入复性稀释缓冲液，然后装入透析袋中依次置于尿素浓度为8 mol/L、6 mol/L、4 mol/L、2 mol/L、1 mol/L和0 mol/L的复性透析缓冲液中进行复性，每12小时更换一次复性透析缓冲液，再用PBS缓冲液进行透析复性，最后用超滤管进行超滤得复性的鸭瘟病毒UL15基因 exonI重组蛋白；所述复性稀释缓冲液含50mmol/L Tris-base、1 mmol/L EDTA、100 mmol/L NaCl、0.25 mol/L L-精氨酸、0.1 mmol/L氧化型谷胱甘肽、1 mmol/L还原型谷胱甘肽和体积分数为5%的甘油；所述复性透析缓冲液含有50mmol/L Tris-base、0.5 mol/L EDTA、150 mmol/L NaCl和0.6mol/L L-精氨酸。

8.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于：所述离心是在4℃、10000r/min条件下离心10min。

9.权利要求1或2所述鸭瘟病毒UL15基因 exonI重组蛋白在制备鸭瘟病毒抗体捕获剂中的应用。

10.权利要求1或2所述鸭瘟病毒UL15基因 exonI重组蛋白在制备抗鸭瘟病毒多克隆抗体的抗原中的应用。