[发明专利]一种乙型肝炎病毒HBV实时荧光核酸恒温扩增检测试剂盒

权利要求书

1.一种乙型肝炎病毒HBV实时荧光核酸恒温扩增检测试剂盒，包含有一条乙型肝炎病毒靶标核酸的捕获探针，一对用于靶标核酸扩增的引物T7和nT7，和一条用于与所述靶标核酸扩增产生的RNA拷贝特异结合的检测探针；还包含有HBV内标和内标检测探针；

所述引物由T7引物和nT7引物组成，T7引物序列如序列表中序列1所示，nT7引物序列如序列表中序列2所示；所述检测探针的核苷酸序列如序列表中序列3所示，5’端标记FAM荧光基团，3’端标记DABCYL淬灭基团；

所述HBV内标为乙型肝炎病毒核苷酸序列的竞争性内标，可与捕获探针特异性结合，并使用T7和nT7引物，由序列表中序列6所示的体外转录RNA；

所述内标检测探针的核苷酸序列如序列表中序列7所示。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述捕获探针的核苷酸序列如序列表中序列4所示。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述捕获探针的核苷酸序列如序列表中序列5所示。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述捕获探针为序列表中序列4与序列5按1:1～6:1比例混合组成。

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包含有M-MLV反转录酶和T7RNA聚合酶，所述M-MLV反转录酶和T7RNA聚合酶存在于SAT酶液中，所述捕获探针存在于病毒核酸提取液中，所述T7引物、nT7引物和检测探针存在于扩增检测液中。

6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述内标检测探针的5’端标记HEX荧光基团，3’端标记DABCYL淬灭基团，且所述内标检测探针存在于扩增检测液中。

7.根据权利要求1至6任一所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包含病毒核酸提取液、洗涤液1、洗涤液2、HBV扩增检测液、SAT酶液、HBV阳性对照、HBV阴性对照、HBV内标和稀释液，其中：

病毒核酸提取液：含捕获探针和磁珠；

洗涤液1：含NaCl和SDS；

洗涤液2：矿物油；

HBV扩增检测液：含dNTP、NTP、T7引物、nT7引物、HBV检测探针和内标检测探针；

SAT酶液：含M-MLV反转录酶、T7RNA聚合酶；

HBV阳性对照；含乙型肝炎病毒表面抗原基因核酸的稀释液或乙型肝炎病毒体外转录RNA的稀释物；

HBV阴性对照：不含有乙型肝炎病毒靶标核酸序列或不含有乙型肝炎病毒的血清或血浆溶液；

HBV内标：HBV IC RNA稀释物；

稀释液：含硫酸铵(NH₄)₂SO₄和HEPES。