[发明专利]一种骨质疏松斑马鱼模型的构建方法及其应用

权利要求书

1.一种骨质疏松斑马鱼模型的构建方法，其包括以下步骤：

(1)斑马鱼的繁殖；

(2)转基因斑马鱼的构建；

(3)采用药物对转基因斑马鱼进行造模；

其特征在于，在步骤(2)所述的转基因斑马鱼的构建过程中，应用tol2-gateway转基因技术分别构建质粒5’Entry clone:p5E-Osterix，Middle Entry clone:pME-nls EGFP和3’Entry clone:p3E-Poly A，并将上述质粒进行三片段LR反应，获得表达质粒pDestTol2CG2-osterix-nls-EGFP-pA，最后将所述表达质粒与Tol2mRNA混合，显微注射到斑马鱼胚胎细胞中。

2.根据权利要求1所述的骨质疏松斑马鱼模型的构建方法，其中步骤(2)中所述的表达质粒pDestTol2CG2-osterix-nls-EGFP-pA的结构如图1所示。

3.根据权利要求1所述的骨质疏松斑马鱼模型的构建方法，其中步骤(3)中所采用的药物为地塞米松DEX，其最佳浓度为10μM。

4.根据权利要求1所述的骨质疏松斑马鱼模型的构建方法，其中还进一步包括对骨质疏松斑马鱼模型进行评估验证的步骤。

5.根据权利要求4所述的骨质疏松斑马鱼模型的构建方法，其中所述的评估验证包括药物评估验证、骨矿化定量分析、行为学分析和骨相关因子水平变化监测。

6.根据权利要求5所述的骨质疏松斑马鱼模型的构建方法，其中药物评估验证所采用的药物分别为地塞米松DEX和淫羊藿黄酮FE，其中淫羊藿黄酮FE的最佳拯救浓度为1μg/ml。

7.权利要求1-6所述的骨质疏松斑马鱼模型在筛选抗骨质疏松药物中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其中所述药物分别为骨吸收抑制剂类药物、骨形成促进类药物、骨矿化促进类药物以及中药类药物。

9.根据权利要求8所述的应用，其中所述的骨吸收抑制剂类药物为双膦酸盐、降钙素、雌激素、雌激素受体调节剂和依普黄酮，骨形成促进类药物为氟制剂、甲状旁腺激素制剂、活性维生素D制剂，骨矿化促进类药物为钙剂、维生素D及其活性代谢物。

10.根据权利要求7所述的应用，其中所述的中药类药物为淫羊藿、熟地、杜仲、丹参、黄芪和蛇床子。