[发明专利]卡特兰初代诱导培养基及外植体预处理方法

说明书

技术领域

本发明涉及兰花组织培养技术领域，特别是涉及一种卡特兰初代诱导培养基及外植体预处理方法。

背景技术

卡特兰，又名嘉德丽亚兰(Cattleya Hybrida)，因其花朵硕大，色泽艳丽，富有美感，品种众多，有的品种还具有芳香气味，而被誉为“洋兰之王”，具有极高的欣赏价值和经济价值。

卡特兰的繁殖可以通过种子繁殖、分株繁殖和组织培养。由于卡特兰种子在自然条件下极难萌发，分株法繁殖率低，难以达到大规模生产的目的，而组织培养法是目前卡特兰大规模生产的主要方法。然而，卡特兰的外植体在组织培养过程中极易褐化坏死，是原球茎诱导成功的一大障碍，也是制约卡特兰组培快速繁殖的关键。

针对卡特兰外植体褐化问题，现有的卡特兰初代诱导培养基通常在1/4MS培养基的基础上，添加2.5～3mg/L的6-BA、0.15～0.2mg/L的NAA、6～7g/L的琼脂粉、25～30g/L的蔗糖，以及0.1％～0.2％的活性炭。活性炭对酚类物质有吸附作用，能减少酚类物质被氧化为醌类物质，减少褐化现象，然而，活性炭的吸附作用是没有选择性的，在吸附酚类物质的同时，亦会吸附培养基中的其它营养成分，对外植体的诱导分化产生负面影响。

发明内容

基于此，有必要针对卡特兰组织培养过程中外植体褐化的问题，提供一种能有效减少卡特兰外植体褐化的卡特兰初代诱导培养基。

此外，有必要针对卡特兰组织培养过程中外植体褐化的问题，提供一种能有效减少卡特兰外植体褐化的卡特兰外植体预处理方法。

一种卡特兰初代诱导培养基，其以改良MS培养基为基础培养基，并添加有柠檬酸、水杨酸、硝酸镧、6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)、萘乙酸(NAA)、琼脂粉、蔗糖和硅胶。

在其中一个实施例中，所述改良MS培养基中，二水氯化钙(CaCl₂·2H₂O)的浓度为230mg/L，维生素B1的浓度为1mg/L，其余成分及其浓度与标准MS培养基相同。

在其中一个实施例中，柠檬酸的浓度为30～80mg/L，水杨酸的浓度为50～150mg/L，硝酸镧的浓度为3～7mg/L，6-BA的浓度为2.5～3mg/L，NAA的浓度为0.15～0.2mg/L，琼脂粉的浓度为6～7g/L，蔗糖浓度为25～30g/L，硅胶的浓度为1～5g/L。

在其中一个实施例中，柠檬酸的浓度为50mg/L，水杨酸的浓度为100mg/L，硝酸镧的浓度为5mg/L，6-BA的浓度为3mg/L，NAA的浓度为0.2mg/L，琼脂粉的浓度为6g/L，蔗糖浓度为30g/L，硅胶的浓度为3g/L。

在其中一个实施例中，所述的硅胶为固体，呈颗粒状、管状或棒状，其均匀镶嵌于经凝固后的卡特兰初代诱导培养基中。

在其中一个实施例中，所述卡特兰初代诱导培养基的pH值为5.5。

一种卡特兰外植体预处理方法，包括以下步骤：取健康、生长良好的卡特兰侧芽作为外植体，于2～5℃低温处理12～24小时，经灭菌处理后将侧芽接种于本发明所述的卡特兰初代诱导培养基中，然后置于人工气候箱中，在温度为15～20℃、湿度为80～90％、光照强度为1800～2000lux、光暗周期为12h光照/12h黑暗的条件下进行培养，诱导出原球茎。

在其中一个实施例中，所述的灭菌处理包括以下步骤：在超净工作台中，取出低温处理后的侧芽，除去侧芽外的苞片，侧芽留一片叶子，用70％的酒精擦洗几秒，用无菌水冲洗干净后，置于质量浓度为0.1％的氯化汞溶液中灭菌5～10分钟，再用无菌水冲洗干净。