[发明专利]一种同时测定卡培立肽中的DMF、NMP和DMSO杂质的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种同时测定多肽药物卡培立肽中N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、N-甲基吡咯烷酮(NMP)和二甲基亚砜(DMSO)杂质残留量的液相色谱方法。

背景技术

卡培立肽，别名基因重组心房肽、卡哌利丁、人脑利钠肽，本品为28个氨基酸组成的一种循环调节激素，起血管扩张和利尿作用，主要用于急性心功能衰竭(包括慢性心衰急性加重)。

N,N-二甲基甲酰胺(DMF)，英文名称：N,N-Dimethylformamide，分子式：C3H7NO。分子量为73.0，CAS号：68-12-2，为无色高沸点液体。主要作为有机溶剂用于制造清腈纶和氯纶，亦用于有机合成、染料、制药、树脂、皮革等工业生产。对皮肤、黏膜有刺激性，进入人体后可损伤中枢神经系统和肝、肾、胃等重要脏器。对环境可能也有危害。

N-甲基吡咯烷酮(NMP)，英文名称：N-Methyl pyrrolidone，分子式：：C5H9NO。，CAS号：872-50-4，为无色透明油状液体，微有胺的气味。本品是重要的化工原料，是一种选择性强和稳定性好的极性溶剂。对皮肤有轻度刺激作用，但慢性作用可致中枢神经系统机能障碍，引起呼吸器官、肾脏、血管系统的病变。

二甲基亚砜(DMSO)，英文名：Dimethyl sulfoxide，分子式：C2H6OS，分子量：78.12，CAS号：67-68-5，为无色黏稠透明油状液体，几乎无臭，稍带苦味，二甲基亚砜广泛用作溶剂和反应试剂,对人体皮肤有渗透性，对眼有刺激作用。

在药物的合成工艺中，N,N-二甲基甲酰胺、N-甲基吡咯烷酮和二甲基亚砜主要被当作溶剂使用，所以在终产物中可能会残留这三种溶剂。能够准确、可靠的分析出多肽药物卡培立肽中残留溶剂N,N-二甲基甲酰胺、N-甲基吡咯烷酮和二甲基亚砜的含量，对于药物的生产控制和产品质量控制具有重要的实用价值。

对于残留溶剂的测定一般首选气相色谱法进行测定，但是，N,N-二甲基甲酰胺的沸点为152℃，N-甲基吡咯烷酮的沸点为203℃，二甲基亚砜的沸点为189℃，可见三种溶剂均为高沸点物质。若使用气相色谱顶空进样的方法，各溶剂的检出灵敏较低，顶空方法不适用。只能使用直接进样的方式，但由于直接进样对衬管及毛细管均有严重的污染，干扰丰常严重，所以方法的耐用性很差。

在卡培立肽的工业化生产中，上述DMSO、NMP、DMF都是必不可少的溶剂体系，因此，一种适用于检测卡培立肽中的DMSO、NMP、DMF杂质的方法，在工业上有很大的需求。

发明内容

针对上述问题，发明人经过试验研究，得出一种能够同时测定多肽药物卡培立肽中N,N-二甲基甲酰胺、N-甲基吡咯烷酮和二甲基亚砜的液相色谱分析方法。

本发明首先涉及一种能够同时测定多肽药物卡培立肽中浓度范围分别为0.2～5000ppm的N,N-二甲基甲酰胺、N-甲基吡咯烷酮和二甲基亚砜杂质的液相色谱分析方法，其步骤包括：

(1)准确称取一定量的样品，经流动相B溶解，制成每1ml中含样品约5mg的溶液；

(2)直接将样品进行液相色谱分析，计算得出样品中N,N-二甲基甲酰胺、N-甲基吡咯烷酮和二甲基亚砜的含量。

其中，步骤(1)中的流动相B包括纯水、乙腈、甲醇、甲醇水溶液等，优选为磷酸水溶液和乙腈按比例为0～100:1混合的混合液，其中磷酸水溶液中的磷酸含量为0～5％(v/v)，优选为0.05％(v/v)。

流动相A包括纯水、乙腈、甲醇、甲醇水溶液等，优选为磷酸水溶液和乙腈按比例为1:0～100混合的混合液，其中磷酸水溶液中的磷酸含量为0～5％(v/v)，优选为0.05％。

步骤(2)中样品的进样浓度为0.5～100mg/ml，优选为5mg/ml。

步骤(2)所述的液相色谱条件为：

1)色谱柱是C8、C18色谱柱，色谱柱长为5～25cm，内径：2.1～4.6mm，例如Welch UItimate SiO₂(4.6×250mm，5μm)、Merck ZIC-HILIC(250mm×2.1mm，3.5um)；粒径：2.1～5μm；优选为Agilent Zorbax RX-SIL(4.6×250mm,5μm)或其等效柱；

2)进样量为1～200微升，柱温为20～60度；

3)检测器为紫外检测器，检测波长为190～210nm，流速为0.2～2mL/min；