[发明专利]一种末端脱氧核苷酰转移酶活性测定方法无效
| 申请号： | 201410502145.1 | 申请日： | 2014-09-28 |
| 公开（公告）号： | CN104293883A | 公开（公告）日： | 2015-01-21 |
| 发明（设计）人： | 徐晓昱;王静 | 申请（专利权）人： | 南京诺唯赞生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/48 | 分类号： | C12Q1/48 |
| 代理公司： | 南京正联知识产权代理有限公司 32243 | 代理人： | 王素琴 |
| 地址： | 210014 江苏省*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 末端 脱氧 核苷 转移酶 活性 测定 方法 | ||
1. 一种末端脱氧核苷酰转移酶活性测定方法，其特征在于，所述方法包括：首先根据单链模板合成引物，与单链模板退火，然后在四种脱氧核苷三磷酸中的一种的存在下进行TdT酶催化的3’端加尾反应，反应完成后在足量没有3’-5’外切酶活性的DNA聚合酶存在下进行聚合反应生成双链DNA，最后测定聚合反应完成后反应体系中双链DNA或单链DNA的相对量，并通过该检测结果推导出Poly (A)聚合酶活性程度，其中所用单链模板上引物3’方向上第一位的碱基与加尾反应中所用的那种脱氧核苷三磷酸不互补。
2. 如权利要求1所述的末端脱氧核苷酰转移酶活性测定方法，其特征在于，反应体系中双链DNA或单链DNA的相对量是利用仅与双链DNA或仅与单链DNA结合的荧光染料，利用荧光法检测得到的，并且双链DNA或单链DNA的相对量是以荧光强度表示的。
3. 如权利要求2所述的末端脱氧核苷酰转移酶活性测定方法，其特征在于，所采用的荧光染料是双链DNA特异性荧光染料。
4. 如权利要求3所述的末端脱氧核苷酰转移酶活性测定方法，其特征在于，所述荧光染料是picogreen染料。
5. 如权利要求1所述的末端脱氧核苷酰转移酶活性测定方法，其特征在于，所采用的单链模板是单链环状DNA模板。
6. 如权利要求5所述的末端脱氧核苷酰转移酶活性测定方法，其特征在于，所采用的单链模板是M13噬菌体单链DNA。
7. 如权利要求6所述的末端脱氧核苷酰转移酶活性测定方法，其特征在于，所用的引物是5’-aagccatccgcaaaaatgacctct-3’。
8. 如权利要求1所述的末端脱氧核苷酰转移酶活性测定方法，其特征在于，所采用的DNA聚合酶是Taq酶。
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