[发明专利]一种用于蛋白质分离的WCX/HIC双功能混合模式聚合物基质色谱固定相及其制备方法

权利要求书

1.结构式（I）所示的疏水/弱阳离子交换混合模式色谱固定相，

其中为聚甲基丙烯酸环氧丙酯，

R₁为或-(CH₂)_n-, n为1～3的整数；

R₂为，或-(CH₂)_n-，n为1～3的整数。

2.根据权利要求1所述的色谱固定相，其特征在于结构式（I）为：

。

3.权利要求1所述色谱固定相的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）将聚甲基丙烯酸环氧丙酯P_GMA/EDMA分散在硫酸溶液中得到环氧基水解成邻二醇的聚甲基丙烯酸环氧丙酯微球；

（2）将步骤（1）制备的水解聚甲基丙烯酸环氧丙酯微球分散于二氧六环中，加入三氟化硼乙醚和环氧氯丙烷，反应得到含有氯基团的聚甲基丙烯酸环氧丙酯微球；

（3）将步骤（2）制备的含氯基团的聚甲基丙烯酸环氧丙酯微球分散于乙醇中，加入硫脲进一步反应得到含巯基的聚甲基丙烯酸环氧丙酯微球；

（4）将步骤（3）制备的含巯基的聚甲基丙烯酸环氧丙酯微球分散于甲苯中，加入相应的有机酸或酸酐和过氧化苯甲酰反应，产物经洗净得到疏水/弱阳离子交换混合模式聚合物基质色谱固定相。

4.权利要求2所述色谱固定相的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）取一份重量的聚甲基丙烯酸环氧丙酯P_GMA/EDMA微球分散于0.1 mol/L硫酸中，60 °C下搅拌10小时，然后分别用蒸馏水和甲醇洗涤至中性并于50 °C下真空干燥5小时；

（2）将步骤（1）制备的水解P_GMA/EDMA微球分散于一份体积的二氧六环中，加入1/60体积的三氟化硼乙醚和1.5倍微球质量的环氧氯丙烷，80°C下搅拌3小时，然后用乙醇及甲醇各洗涤三遍并于50 °C下真空干燥5小时，即得含氯基团的微球；

（3）将步骤（2）制备的含氯基团的微球分散于乙醇中，加入0.3倍微球重量的硫脲，75°C下搅拌3小时，再加入相同体积10%的NaOH溶液，75°C下搅拌2小时，然后依次用蒸馏水、1mmol/L的盐酸、蒸馏水和甲醇洗涤三遍，50 °C下真空干燥5小时，即得含巯基的微球；

（4）将步骤（3）制备的含巯基的微球分散于甲苯中，加入0.2倍微球重量的马来酸酐和少量过氧化苯甲酰，通氮气20分钟后在70°C下搅拌2小时；将产物用丙酮洗涤三遍，在0.1mol/L的NaOH溶液中搅拌10小时，然后依次蒸馏水和甲醇洗涤三遍，50 °C下真空干燥5小时，即得所述的弱阳离子交换/疏水混合模式色谱固定相，

。

5.根据权利要求3或4所述色谱固定相制备方法，其特征在于：步骤（1）中所用的聚甲基丙烯酸环氧丙酯微球P_GMA/EDMA，其粒径为3～40μm，孔径为150～1000?，交联剂为甲基丙烯酸乙二醇酯，交联度为40~50%。