[发明专利]一种重组菌丝霉素及其表达纯化的方法和应用

权利要求书

1.一种菌丝霉素，其特征在于：其核苷酸序列如SEQ ID NO. 1所示。

2.一种重组菌丝霉素，其特征在于：其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.一种重组载体，其特征在于：其为含有SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列的pE-SUMO重组载体。

4.一种重组菌，其特征在于：其含有权利要求3所述的重组载体。

5.一种重组菌丝霉素的表达和纯化的方法，其特征在于：包括以下步骤：

1）取权利要求4 所述的重组菌，增殖培养，诱导表达培养，离心，得菌体；

2）取步骤1）所得菌体，裂解，离心，得裂解上清液；

3）将上述上清液进行使用Ni-NTA亲和层析纯化，即得重组菌丝霉素。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：步骤1）中，所述重组菌为重组大肠杆菌BL21(DE3)，培养基为LB 培养基，增殖培养的条件是37℃、180 r/min 振荡培养至OD₆₀₀为0.5。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：步骤1）中所述诱导表达培养的条件是30℃、180 r/min 振荡培养6h，使用的诱导剂是浓度为0.05mM的IPTG。

8.根据权利要求5 所述的方法，其特征在于：步骤2）中所述裂解为冰浴超声破碎，破碎条件为工作时间5s，间歇时间5s，功率400W，工作时间20min。

9.根据权利要求5 所述的方法，其特征在于：步骤3）中所述纯化的具体步骤为：每5mL Ni-NTA树脂用50ml NTA20平衡后，与上清液混合，4 ℃摇动结合1 h后；再将Ni-NTA树脂装入层析柱，流速为2mL/min；使用pH 7.4磷酸盐缓冲液以流速2 mL/min洗涤；用咪唑浓度为500mmol/L的含0.1%Tween20的 pH7.4磷酸钠洗脱液洗脱，FPLC自动收集洗脱液。

10.一种菌丝霉素的表达和纯化的方法，其特征在于：将权利要求5～9任一获得的重组菌丝霉素经酶SUMOpro酶切，透析，即可，所述透析用截留分子量为3kDa的透析袋进行透析。