[发明专利]山莨菪根的HPLC指纹图谱检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及山莨菪根的HPLC指纹图谱检测方法。

背景技术

山莨菪Anisodus tanguticus(Maxim.)Pascher为茄科山莨菪属植物，是中国特有植物，野生分布于海拔2 800～4 200m的山坡及草坡阳处，目前尚有少量栽培。四川甘孜州和阿坝州的野生山莨菪资源极为丰富，藏医常以种子和根入药，其根的藏药名为“唐冲那保”或“唐冲纳波”，已收入2014年版《四川省藏药材标准》，具有止痛解痉、镇静镇惊、止咳平喘等功效。现代研究表明，山莨菪根主要含莨菪烷类生物碱，如樟柳碱、山莨菪碱、东莨菪碱、阿托品等，具有调节植物神经功能紊乱，兴奋循环和呼吸中枢，调节免疫功能，解除平滑肌痉挛，封闭M和α受体，活化β受体，活跃和疏通微循环，增强人工膜的流动性等药理活性。

前期研究发现，由于受产地生态环境等的影响，不同来源的山莨菪根的生物碱类成分含量差异较大，目前尚未见国内外文献报道该药材的高效液相色谱指纹图谱，因此本发明将采用HPLC-DAD进行山莨菪根的指纹图谱研究，并对不同产地生态环境的山莨菪根进行比较，为其鉴别与质量控制提供依据。

发明内容

本发明的目的在于提供对山莨菪根品质的鉴别方法。

具体地，本发明提供了山莨菪根的HPLC指纹图谱检测方法，它包括如下操作步骤：

(1)供试品溶液的制备：取待检药材，粉碎后，以甲醇提取，提取液过滤，制备供试品溶液；

(2)将供试品溶液注入高效液相色谱仪中，在如下色谱条件下检测即可：

色谱柱：十八烷基键合硅胶柱；检测波长：210±3nm；流速0.8～1.2mL/min；柱温30±5℃；

流动相：A(乙腈)―B(10mmol/L KH₂PO₄缓冲液，用H₃PO₄调节pH至2.5～4.0)，流动相A的浓度变化为：0～5min，10％；5～40min，10％～25％；40～41min，25％～90％；41～50min，90％～90％；50～55min，90％～10％；55～60min，10％～10％。

进一步地，所述色谱柱尺寸为5μm,4.6×250mm。

更进一步地，所述色谱柱为Ultimate AQ C₁₈柱。

进一步地，检测波长为210nm。

进一步地，流速为1.0mL/min。

进一步地，：柱温为30℃。

进一步地，步骤(1)中，提取方法为回流、浸渍或超声。

进一步地，将供试品色谱图与对照指纹图谱进行对比，相似度为0.850的药材即为山莨菪根；所述对照指纹图谱中有15个共有峰，以阿托品为对照，各共有峰的相对保留时间为：峰1：0.281，峰2：0.336，峰3：0.353，峰4：0.413，峰5：0.493，峰6：0.576，峰7：0.613，峰8：0.724，峰9：0.793，峰10：0.897，峰11：1.000，峰12：1.235，峰13：1.346，峰4：1.439，峰15：1.569。

进一步地，所述对照指纹图谱中各共有峰的相对峰面积为：峰1：0.205～9.169、峰2：0.059～4.681、峰3：0.033～2.253、峰4：0.017～1.991、峰5：0.047～30.551、峰6：1.673～123.29、峰7：0.505～39.002、峰8：0.076～1.637、峰9：0.158～15.372、峰10：0.247～17.305、峰11：1.000、峰12：0.427～11.843、峰13：0.016～2.53、峰14：0.02～0.474、峰15：0.005～0.925。

优选地，所述对照指纹图谱如图1所示。

本发明检测方法中，各批山莨菪根样品的指纹图谱具有相似性，主要峰群的整体面貌基本一致，仅各成分的峰面积有较大差异，这与产地生态环境等因素有关。试验表明，运用本发明指纹图谱技术，能综合、全面地判别药材的品质，因此，可作为山莨菪根的鉴别和质量检测的一种手段。

附图说明

图1山莨菪根的HPLC对照指纹图谱

图2对照品(A)和样品(B)的HPLC色谱图(2.樟柳碱a.东莨菪碱8.山莨菪碱11.阿托品)

图318批山莨菪根HPLC指纹图谱

图44种生物碱的紫外光谱扫描图

图5样品的3D紫外光谱扫描图