[发明专利]一种北缬草组织培养繁殖方法

权利要求书

1.一种北缬草(Valeriana fauriei Briq.)组织培养繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)外植体诱导：取北缬草幼嫩的茎段作为外植体，进行无菌处理，接种于启动培养基培养至获得不定芽；

(2)继代增殖培养：将步骤(1)中形成的不定芽在无菌条件下切下，接种至增殖培养基上进行增殖；

(3)生根培养：将步骤(2)所得不定芽在无菌条件下分离并接种至生根培养基中进行根诱导和壮苗，得到完整的组培苗；

(4)组培苗移栽：将步骤(3)中的健壮的组培苗加入少量无菌水，半开盖培养5～10天，再全开盖培养5～10天；将组培苗从培养瓶中取出，洗净根部培养基，栽入由蛭石和营养土按1∶1～1∶3的比例混合成的培养基质中炼苗培育成健壮的幼苗；

其中，步骤(1)中启动培养基为0.2～1.0mg/L 6-BA、0.01～0.02mg/L IBA和8g/L琼脂的pH为5.8的MS培养基；

其中，步骤(2)中增殖培养基为0.2～1.0mg/L 6-BA、0.01～0.02mg/L IBA和8g/L琼脂的pH为5.8的MS培养基；

其中，步骤(3)中培养基为0.1～0.5mg/L IBA和8g/L琼脂的pH为5.8的1/2MS培养基。

2.如权利要求1所述北缬草组织培养繁殖的方法，其特征在于步骤(1)所述对外植体进行除菌处理的方法为：用自来水冲洗15～25min，用60～80％乙醇消毒30～90s，用0.5～1.5％次氯酸钠溶液消毒10～20min后取出，用无菌水冲洗3～5次，用灭菌后的滤纸吸干表面水分，得到无菌北缬草外植体。

3.如权利要求1所述北缬草的组织培养繁殖的方法，其特征在于步骤(1)、步骤(2)与步骤(3)中培养条件：2～5％蔗糖、0.5～2％琼脂，pH5～6，培养温度为20～30℃，光照时间12～20h·d^-1，光照2500～4000lux。

4.如权利要求1所述培养条件，其特征在于：3～4％蔗糖、0.5～1％琼脂，pH5.5～6，培养温度为24～26℃，光照时间15～18h·d^-1，光照3000lux。

5.如权利要求1所述北缬草组织培养繁殖的方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)外植体诱导：将幼嫩的茎段用自来水冲洗20min，用70％乙醇消毒1min，用1％次氯酸钠溶液消毒15min后取出，用无菌水冲洗4次，接种于培养基上培养，置于光照3000lux，光照时间16h·d-1，温度为25±1℃下培养；

(2)继代增殖培养：将步骤(1)中形成的不定芽在无菌条件下切下，接种在增殖培养基上进行增殖实验，得到继代增殖的丛生芽；

(3)生根培养：将步骤(2)所得丛生芽在无菌条件下分离并接种至生根培养基中进行根诱导和壮苗，得到完整的组培苗；

(4)组培苗移栽：将步骤(3)中的健壮的组培苗加入少量无菌水，半开盖培养1周，再全开盖培养1周；将组培苗从培养瓶中取出，洗净根部培养基，栽入由蛭石和营养土按1∶1的比例混合成的培养基质中炼苗培育成健壮的幼苗；移栽培养期间注意保持生长环境湿度、适度遮阴、保温；生长适温22～28℃，夜温20～22℃；

其中，步骤(1)中启动培养基为1.0mg/L 6-BA、0.02mg/L IBA和8g/L琼脂的pH为5.8的MS培养基或0.5mg/L 6-BA、0.01mg/L IBA和8g/L琼脂的pH为5.8的MS培养基或0.2mg/L 6-BA、0.01mg/L IBA和8g/L琼脂的pH为5.8的MS培养基；

其中，步骤(2)中增殖培养基为1.0mg/L 6-BA、0.02mg/L IBA和8g/L琼脂的pH为5.8的MS培养基；

其中，步骤(3)中培养基为0.1mg/L IBA和8g/L琼脂的pH为5.8的1/2MS培养基；

其中，步骤(1)、步骤(2)与步骤(3)中培养基均加入3％蔗糖、0.8％琼脂，pH 5.8，培养温度为(25±1)℃，光照时间16h·d^-1，光照3000lux。