[发明专利]重组酰胺酶Dt‑Ami2、编码基因、载体、工程菌及应用

权利要求书

1.一种重组酰胺酶Dt-Ami 2在水解酰胺制备羧酸中的应用，其特征在于所述的应用为：将含重组酰胺酶Dt-Ami 2基因的工程菌经发酵培养获得的湿菌体用pH 8.0Tris-HCl缓冲液悬浮后进行超声破碎，取上清液提取纯酶作为催化剂，以式(Ⅰ)所示化合物、式(Ⅱ)所示化合物、2,2-二甲基环丙甲酰胺、色氨酰胺或2-氨基-4-甲硫基丁酰胺为底物，以pH 6～9的Tris-HCl缓冲液为反应介质构成反应体系，在25～45℃下进行水解反应，反应结束后，将反应液分离纯化，获得羧酸产物；所述酰胺酶Dt-Ami 2的氨基酸序列为SEQ ID NO.2所示；

式(Ⅰ)中R₁为C1～C4烷基，R₂为氢、羟基或甲基；式(Ⅱ)中R₃为苯基、苄基、对羟基苄基或苯乙基。

2.如权利要求1所述应用，其特征在于所述催化剂的用量以破碎前湿菌体重量计为0.08～8g/L反应体系，所述底物初始浓度为20mmol/L反应体系。

3.如权利要求1所述应用，其特征在于所述底物为丙酰胺、正丁酰胺、异丁酰胺、戊酰胺、己酰胺、(S)-乳酰胺、(R)-乳酰胺、苯甲酰胺、苯乙酰胺、4-羟基苯乙酰胺、苯丙酰胺、2,2-二甲基环丙甲酰胺、色氨酰胺或2-氨基-4-甲硫基丁酰胺。

4.如权利要求1所述应用，其特征在于所述催化剂按如下方法制备：将含重组酰胺酶Dt-Ami 2的工程菌经发酵培养获得的湿菌体用pH 8.0Tris-HCl缓冲液悬浮后进行超声破碎，将破碎混合液离心，取上清液进行Ni-NTA柱层析，以洗脱缓冲液洗脱，收集目标蛋白，将收集的目标蛋白在20mM，pH 8.0的Tris-HCl中透析过夜，取透过液即获得催化剂；所述洗脱缓冲液为含终浓度500mM咪唑和终浓度500mM NaCl的20mM、pH 8.0Tris-HCl的缓冲液。