[发明专利]一种豇豆花叶病毒属病毒广谱检测试剂盒及其检测方法

说明书

技术领域

本发明属于植物检疫技术领域，涉及一种豇豆花叶病毒属病毒广谱检测试剂盒及其检测方法，特别涉及用于检测豇豆花叶病毒属病毒的引物组、试剂盒及其检测方法。

背景技术

豇豆花叶病毒属(Comovirus)是类小RNA病毒目(Picornavirales)、伴生豇豆病毒科(Secoviridae)中的八个病毒属之一，与蚕豆病毒属(Fabavirus)、线虫传多面体病毒属(Nepovirus)组成豇豆花叶病毒亚科(Comovirinae)，共有15种病毒成员、1种暂定种。该类病毒的寄主范围较窄，已发现的15种豇豆花叶病毒属病毒中，有11种病毒仅侵染豆科植物，如大豆、豇豆、蚕豆等；有3种病毒分别危害茄科、十字花科、葫芦科等植物；其余2种分别危害红三叶草、块根落葵。花叶和斑驳是该属病毒为害的主要症状特征，通常不产生环斑。该类病毒可以通过甲虫介体传播，尤其是金花虫科的一些种类，甲虫保毒能力达数日至数周。另外，菜豆荚斑驳病毒(BPMV)、蚕豆染色病毒(BBSV)、蚕豆真花叶病毒(BBTMV)、豇豆花叶病毒(CPMV)、豇豆重花叶病毒(CPSMV)、豌豆轻型花叶病毒(PmiMV)、南瓜花叶病毒(SqMV)等7种病毒种类还可通过种子传播。

该类病毒中的多种病毒成员具有十分重要的经济重要性，对农业生产安全和生态安全造成巨大的威胁。豇豆花叶病毒属病毒的许多成员具有重大检疫重要性，多种病毒被世界各国列为禁止进境的检疫性有害生物。其中，安第斯马铃薯斑驳病毒(APMoV)被欧洲与地中海植物保护组织(EPPO)、加拿大、乌克兰等国家或地区列为检疫性有害生物；菜豆荚斑驳病毒(BPMV)被我国(包括台湾地区)等国家或地区列为禁止进境的检疫性有害生物；菜豆粗缩花叶病毒(BRMV)被台湾地区列为禁止进境的检疫性有害生物；蚕豆染色病毒(BBSV)被我国(包括台湾地区)等国家或地区列为禁止进境的检疫性有害生物；蚕豆真花叶病毒(BBTMV)被摩洛哥、台湾等国家或地区列为禁止进境的检疫性有害生物；豇豆花叶病毒(CPMV)被台湾地区等列为禁止进境的检疫性有害生物；豇豆重型花叶病毒(CPSMV)被我国(包括台湾地区)等国家或地区列为禁止进境的检疫性有害生物；被台湾地区列为禁止进境的检疫性有害生物还有大豆属花叶病毒(GMV)、豌豆轻型花叶病毒(PMiMV)、红三叶草斑驳病毒(RCMV)、南瓜花叶病毒(SqMV)、块根落葵C病毒(UVC)。

目前，在植物病毒日常检测中，普遍采用血清学和分子生物学方法，特别是ELISA和RT-PCR方法。ELISA检测需要特异的抗体，通常都是需要由专业的试剂公司制备和提供，并且国内外检测试剂公司提供的ELISA检测试剂种类十分有限。据不完全统计，国内外各试剂公司提供的豇豆花叶病毒属病毒抗体共有11种，但并不是常年供应，有些病毒种类会出现缺货现象。RT-PCR方法是植物病毒检测中使用非常广泛的另外一种特异性检测方法。目前，世界各国密切关注的只有BPMV、CPMV、CPSMV、SqMV等几种豇豆花叶病毒属病毒，建立了这些病毒的特异性RT-PCR。因此，多数的豇豆花叶病毒属病毒种类没有相应的血清学，特别是分子检测方法。