[发明专利]一种豇豆花叶病毒属病毒广谱检测试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.用于检测豇豆花叶病毒属病毒的引物组，为引物组A或引物组B；

所述引物组A由一条反转录引物和四条扩增引物组成；所述反转录引物为序列表中序列1所示的单链DNA；所述四条扩增引物为序列表中序列2、序列3、序列4和序列5所示的四条单链DNA；

所述引物组B由四条扩增引物组成；所述四条扩增引物为序列表中序列2、序列3、序列4和序列5所示的四条单链DNA。

2.用于检测豇豆花叶病毒属病毒的试剂，包括权利要求1所述的引物组，以及如下中的至少一种：dNTPs、Mg²⁺、DNA聚合酶、反转录酶和RNA酶抑制剂。

3.用于检测豇豆花叶病毒属病毒的试剂盒，含有权利要求1所述的引物组或权利要求2所述的试剂，以及作为阳性对照的豇豆花叶病毒属病毒的病叶冻干粉末；和/或作为阴性对照的水。

4.权利要求1所述的引物组或权利要求2所述的试剂或权利要求3所述的试剂盒在检测待测样品中是否含有豇豆花叶病毒属病毒中的应用。

5.一种检测或辅助检测待测样品中是否含有豇豆花叶病毒属病毒的方法，包括如下步骤：

(1)从所述待测样品中提取总RNA，采用权利要求1中所述的反转录引物进行反转录反应，得到待测cDNA；

(2)以所述待测cDNA作为模板，用权利要求1中所述的四条扩增引物进行PCR反应，获得PCR产物；

(3)根据所述PCR产物的大小按照如下方法确定所述待测样品中是否含有豇豆花叶病毒属病毒：若所述PCR产物中含有大小为590～650bp的DNA片段，则所述待测样品中含有或候选含有豇豆花叶病毒属病毒，反之则所述待测样品中不含有或候选不含有豇豆花叶病毒属病毒。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：步骤(2)中，用所述四条扩增引物进行PCR反应时，所述四条扩增引物的摩尔比为：

序列表中序列2所示的单链DNA﹕序列表中序列3所示的单链DNA﹕序列表中序列4所示的单链DNA﹕序列表中序列5所示的单链DNA为1﹕1﹕10﹕10。

7.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于：步骤(2)中，所述进行PCR反应共进行35个循环，前5个循环的退火温度为42℃，后30个循环的退火温度为45℃。

8.根据权利要求5-7中任一所述的方法，其特征在于：步骤(1)中，所述进行反转录反应的温度为42℃。

9.权利要求1所述引物组的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括将权利要求1所述引物组中各单链DNA分别单独包装的步骤。

10.权利要求1所述引物组在制备权利要求2所述试剂或权利要求3所述试剂盒中的应用。