[发明专利]一种荧光探针的制备方法

权利要求书

1.一种荧光探针的制备方法，其特征在于包括以下步骤。

1)壳聚糖溶解在醋酸溶液中,逐滴加入H₂O₂溶液,在水浴中降解；每隔数小时,取溶液,用NaOH溶液沉淀,用去离子水洗至中性,真空干燥备用；

2）用乙酸、NaCl溶液为溶剂,测定,求出特性粘度数后,计算壳聚糖的粘均Mr；

3）称取经不同时间降解的壳聚糖,溶解于醋酸溶液,壳聚糖浓度为0.5%(m/V)；用NaOH调pH=4.6-4.7；取上述壳聚糖的醋酸溶液,逐滴加入TPP溶液,磁力搅拌,得到经TPP交联的壳聚糖纳米粒子悬浊液；

4）高速离心CS纳米粒子,将上层清液倒掉,冲洗微球,备用；将离心后的CS纳米粒子分散在醋酸溶液中,壳聚糖的浓度为1g/L;加入FITC无水二甲基亚砜溶液,壳聚糖纳米粒子分散液和FITC无水二甲基亚砜溶液的体积比为3mL：0.3mL；用锡箔包住反应试管,避光反应3h,得到FITC标记的壳聚糖纳米荧光探针；

5）离心,洗涤,用紫外分光光度计在480nm检测离心上清液,直至在此波长下无吸收。

2.根据权利要求1所述一种荧光探针的制备方法，其特征在于所述步骤1)5g壳聚糖溶解在150mL3%的醋酸溶液中,逐滴加入50mL6%H₂O₂溶液,在水浴中降解；每隔数小时,取50mL溶液,用10mol/L的NaOH溶液沉淀,用去离子水洗至中性,真空干燥备用；

2）用0.1mol/L乙酸0.2mol/LNaCl溶液为溶剂,在25度下测定,求出特性粘度数后,计算壳聚糖的粘均Mr；

3）称取经不同时间降解的壳聚糖,溶解于1%(V/V)的醋酸溶液,壳聚糖浓度为0.5%(m/V)；用10mol/LNaOH调pH=4.6-4.7；取10mL上述壳聚糖的醋酸溶液,逐滴加入3mL0.25%(m/V)TPP溶液,磁力搅拌,得到经TPP交联的壳聚糖纳米粒子悬浊液。

3.根据权利要求1所述一种荧光探针的制备方法，其特征在于所述步骤4）以12000r/min高速离心CS纳米粒子10min,将上层清液倒掉,冲洗微球,备用；将离心后的CS纳米粒子分散在1%(V/V)醋酸溶液中,壳聚糖的浓度为1g/L;加入10g/L的FITC无水二甲基亚砜(DMSO)溶液,壳聚糖纳米粒子分散液和FITC无水二甲基亚砜溶液的体积比为3mL：0.3mL；用锡箔包住反应试管,避光反应3h,得到FITC标记的壳聚糖纳米荧光探针；

5）离心,洗涤,用紫外分光光度计在480nm检测离心上清液,直至在此波长下无吸收。