[发明专利]一种云芝发酵提取胃蛋白酶抑制剂的方法

权利要求书

1.  一种云芝发酵提取胃蛋白酶抑制剂的方法，其特征于，包括以下步骤：

（1）样品预处理：取云芝3-5g冷冻干燥至恒重，粉碎过筛，取筛下样品粉末备用；

（2）菌种培养活化：取步骤（1）中制得的样品粉末置入斜面培养基中进行培养，得到活化的菌株；

（3）摇瓶发酵培养：取步骤（2）中活化的菌株置入发酵瓶中进行摇瓶发酵培养，得菌株发酵液；

（4）胃蛋白酶抑制剂的提取：将步骤（3）中制得的菌株发酵液进行超声波细胞破碎，离心，经大孔树脂脱色，取上清液透析后进行胃蛋白酶抑制剂的纯化,制得胃蛋白酶抑制剂。

2.根据权利要求1所述的一种云芝发酵提取胃蛋白酶抑制剂的方法，其特征于，步骤（1）中所述的粉碎过筛为过40-80目筛。

3.根据权利要求1所述的一种云芝发酵提取胃蛋白酶抑制剂的方法，其特征于，步骤（2）中所述的斜面培养基的组分为：马铃薯15-25%，葡萄糖1-3%，磷酸二氢钾0.1-0.5%，硫酸镁水合物0.1-0.3%，琼脂1-3%。

4.根据权利要求1所述的一种云芝发酵提取胃蛋白酶抑制剂的方法，其特征于，步骤（3）中所述的摇瓶发酵培养基的组分为：马铃薯汁30-50%，葡萄糖1-3%,硫酸镁水合物0.1-0.3%，硫酸钠0.03-0.08%，磷酸二氢钾0.1-0.5%。

5.根据权利要求1所述的一种云芝发酵提取胃蛋白酶抑制剂的方法，其特征于，步骤（2）中所述的斜面培养基及步骤（3）中所述的摇瓶种子培养基均为在121℃条件下湿热灭菌30-40min的培养基。

6.根据权利要求1所述的一种云芝发酵提取胃蛋白酶抑制剂的方法，其特征于，步骤（2）中所述的培养条件为：培养温度25-28℃，培养时间3-5d。

7.根据权利要求1所述的一种云芝发酵提取胃蛋白酶抑制剂的方法，其特征于，步骤（3）中所述的培养条件为：摇床速度200-220r/min，培养温度25-28℃，培养时间3-5d；步骤（4）中所述的超声波细胞破碎时的操作条件为：功率为250-300W，温度为20-25℃，时间为5-8min。

8.根据权利要求1所述的一种云芝发酵提取胃蛋白酶抑制剂的方法，其特征于，步骤（4）中所述的离心的速度为13000-150000r/min,离心时间为5-10min。

9.根据权利要求1所述的一种云芝发酵提取胃蛋白酶抑制剂的方法，其特征于，步骤（4）中所述的胃蛋白酶抑制剂的纯化的具体方法为：采用DEAE-52离子交换层析，以流动相A液洗脱2倍柱床体积后，以20%B液梯度洗脱，取透析后的上清液上样。

10.根据权利要求9所述的一种云芝发酵提取胃蛋白酶抑制剂的方法，其特征于，所述的流动相A液为0.02-0.05mol/L ,PH为6.5-7.0的磷酸盐缓冲液，B液为0.5-0.8mol/L,PH为6.5-7.0的磷酸盐缓冲液，所述的洗脱速度为0.8-1.0ml/min,上样量为3ml。