[发明专利]一种提高百子莲胚性愈伤组织保存效果的方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物或其局部的保存领域，具体涉及一种提高百子莲胚性愈伤组织保存效果的方法。

背景技术

超低温保存是上世纪70年代发展起来的一项现代种质资源离体保存技术。通常在液氮中保存，被保存材料细胞内的物质代谢和生长活动几乎完全停止，处在相对稳定的生物学状态，达到长期保存种质的目的，超低温保存是目前唯一不需要连续继代的中长期保存方式。玻璃化法超低温保存是将细胞或组织置于由一定比例的渗透性和非渗透性保护剂组成的玻璃化溶液中，使材料及其玻璃化溶液在足够快的降温速率下固化成非结晶的玻璃化态，并以这种玻璃态在低温下保存。玻璃化法因操作简单快捷，成本低，适宜保存种类广泛，保存材料遗传性稳定，保存效果好等优点，是近十年来用于优良种质资源中长期保存的首选方法。

百子莲别名蓝百合、非洲百合，为百子莲科百子莲属多年生植物，原产于非洲南部。因其植株挺拔，叶形秀美、叶色浓绿，花量大、色彩鲜艳而备受人们的喜爱，在国外已成为常见的观赏花卉，多用于庭院栽培和切花生产；此外，百子莲还具有固沙护坡的生态作用以及镇痛等药用。我国引入百子莲的时间不长(2000年)，且在上海的结实率低，多依赖于国外进口种子繁殖，因此，通过体细胞胚胎发生的离体快速繁殖和百子莲种质资源的保存对百子莲优质种苗的需求至关重要。相关研究建立了百子莲胚性愈伤组织超低温保存体系，保存后细胞的相对存活率达到了56.94％，但仍不足以满足生产与科研的需求。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种新的提高百子莲胚性愈伤组织保存效果的方法，以克服现有技术中植物及其组织中长期保存难以实现，以及超低温保存的植物或其组织恢复生长率低的缺点。

为了实现上述目的或者其他目的，本发明是通过以下技术方案实现的。

一种提高百子莲胚性愈伤组织保存效果的方法，采用玻璃化法超低温保存的方法对百子莲胚性愈伤组织进行保存，具体步骤如下：

1)预培养：将百子莲胚性愈伤组织置于预培养基上，在0～10℃下预培养1～4天；

2)装载液处理：室温下，将预培养处理后的百子莲胚性愈伤组织在装载液中浸泡处理40～60分钟后移除装载液；

3)玻璃化溶液处理：在0～25℃下使用玻璃化溶液浸泡脱水处理百子莲胚性愈伤组织40～60分钟；

4)液氮保存：保持百子莲胚性愈伤组织在玻璃化溶液中浸泡的状态，并置于液氮中保存；

所述玻璃化溶液为含有0.1～0.5g/L碳纳米管的玻璃化冷冻保护液。

优选地，所述MS培养液含有1900mg/L KNO₃，1650mg/L NH₄NO₃，170mg/L KH₂PO₄，370mg/L MgSO₄·7H₂O，440mg/L CaCl₂·2H₂O，37.3mg/L Na₂-EDTA，27.8mg/L FeSO₄·7H₂O，100mg/L肌醇，0.5mg/L烟酸，0.5mg/L盐酸吡哆醇，0.1mg/L盐酸硫胺素，2mg/L甘氨酸，0.83mg/L KI，6.2mg/L H₃BO₃，22.3mg/L MnSO₄·4H₂O，8.6mg/L ZnSO₄·7H₂O，0.25mg/L Na₂MoO₄·2H₂O，0.025mg/L CuSO₄·5H₂O，0.025mg/L CoCl₂·6H₂O，余量为水。所述MS培养液的pH为5.8。

优选地，预培养培养基为含有0.4～0.8mol/L蔗糖的MS固体培养基。

优选地，预培养培养基为含有0.5mol/L蔗糖的MS固体培养基。