[发明专利]一种抗人FcεRⅠα亚基单克隆抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物工程领域，特别涉及一种抗人FcεRⅠα亚基单克隆抗体及其应用，以及分泌所述抗人FcεRⅠα亚基单克隆抗体的杂交瘤细胞株。

背景技术

IgE(免疫球蛋白E)受体是过敏反应的重要介导物。肥大细胞和嗜碱性粒细胞是Ⅰ型变态反应性疾病和一些肥大细胞相关性疾病如变应性皮炎、皮肌炎、银屑病等的主要效应细胞。过敏原与其特异性IgE结合形成的复合物与肥大细胞和嗜碱性粒细胞等细胞表面IgE受体结合后使IgE受体发生微聚集，触发信号传导，包括蛋白激酶激活、磷脂酰肌醇水解和Ca²⁺流动等，引起细胞介质和细胞因子合成、黏附分子表达增加和细胞伸展、膜皱折形成最终导致细胞脱颗粒，释放血管活性物质及某些酶类引起平滑肌收缩、黏液分泌、血压降低和组织损伤。IgE受体有高、低亲和力两种，FcεRⅠ(IgE高亲和力受体)是其高亲和力受体，主要分布于肥大细胞和嗜碱粒细胞，嗜酸性粒细胞表面也有少量表达。α亚单位是FcεRⅠ与IgE的结合部位。因此，抗FcεRⅠα亚基抗体是一种重要的抗体，其对研究FcεRⅠ表达与疾病的关系、探索经FcεRⅠ介导的肥大细胞活化或抑制机制、研究IgE及其抗体或拮抗剂、FcεRⅠ及其抗体或拮抗剂等方面有极大的作用。

发明内容

本发明要解决的技术问题就是针对现有的抗人FcεRⅠα亚基单克隆抗体特异性不强、免疫效果不佳的问题，提供一种特异性强，可大量生产的抗人FcεRⅠα亚基单克隆抗体及其应用，以及一种分泌该抗人FcεRⅠα亚基单克隆抗体的杂交瘤细胞株。

为解决上述技术问题，本发明采取的技术方案之一是：一种杂交瘤细胞株，所述细胞株保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C201211。

本发明还提供如上所述的杂交瘤细胞株的子代细胞。该杂交瘤细胞长势良好，大小均一，浑亮，透亮，分裂旺盛，有无限分裂的增生能力。

本发明还提供上述杂交瘤细胞株在制备抗人FcεRⅠα亚基单克隆抗体中的应用。所述应用为本领域常规的应用，较佳地为利用所述杂交瘤细胞株分泌或制备抗人FcεRⅠα亚基单克隆抗体。

为解决上述技术问题，本发明采取的技术方案之二是：一种抗人FcεRⅠα亚基单克隆抗体，该单克隆抗体由上述杂交瘤细胞株分泌产生。

为解决上述技术问题，本发明采取的技术方案之三为：一种如上所述抗人FcεRⅠα亚基单克隆抗体的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：

(1)体外培养本发明所述杂交瘤细胞株得到培养液；

(2)将步骤(1)所得培养液离心，收集上清纯化即得抗人FcεRⅠα亚基单克隆抗体。

其中步骤(1)所述的体外培养为本领域常规的体外培养技术，所述培养的温度优选地为37℃，培养的时间优选地为24小时，其中步骤(2)所述离心的速度优选地为3000rpm，离心的时间优选地为5分钟。收集上清液，纯化处理即得小鼠抗人FcεRⅠα亚基单克隆抗体。其中所述的纯化技术为本领域常规的纯化技术，较佳地为利用市售可得的单克隆抗体纯化试剂盒对所得上清液进行纯化处理。

本发明还公开了一种人FcεRⅠα亚基单克隆抗体的制备方法，该制备方法包括以下步骤：

(1)用人FcεR1α亚基重组蛋白免疫小鼠，取免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合，脾细胞与骨髓细胞的细胞数量融合比例为5:1～10:1筛选出对人FcεRⅠα亚基有反应性的杂交瘤细胞；

(2)将所得杂交瘤细胞进行体外传代培养和扩大培养后，从杂交瘤细胞上清液或从注射杂交瘤细胞后的动物腹水内获取抗人FcεRⅠα亚基单克隆抗体。

其中步骤(1)所述免疫小鼠的脾细胞与骨髓细胞融合的比例为本领域常规的融合比例，所述脾细胞与骨髓细胞的融合比例更佳地为：8:1～10:1，优选地为10:1。其中所述骨髓细胞为本领域常规的骨髓细胞，骨髓细胞较佳地为SP2/0细胞。

其中步骤(2)所述的体外传代培养为本领域常规的体外传代培养技术，所述体外传代培养的时间较佳地为六个月以上。其中所述抗人FcεRⅠα亚基单克隆抗体的获取方法为本领域常规的获取方法，所述方法较佳地包括：取8周龄左右BALB/c小鼠，腹腔注射0.3～0.5ml石蜡油，2周后腹腔注射1×10⁶个步骤(1)得到的杂交瘤细胞，注射7～10天后取2～3ml腹水，3000rpm离心3min，收集上清液，即得纯化的小鼠抗人FcεRⅠα亚基单克隆抗体。