[发明专利]一种豆渣蛋白质的提取方法及其用于制备DPP‑IV抑制肽的方法

说明书

技术领域

本发明属于保健食品领域，具体涉及一种豆渣蛋白质的提取方法及其用于制备DPP-IV抑制肽的方法。

背景技术

在豆腐、豆浆和大豆分离蛋白(SPI)的加工中，有大量的副产物豆渣产生，而且豆渣含有15％～20％的蛋白质。国内每年用于加工豆腐或豆奶的大豆约400万吨，用于加工大豆分离蛋白的大豆约为300万吨，产生的豆渣数量是非常庞大的。豆渣是一种纤维状残渣，长期以来，由于新鲜豆渣含水量高(可达75-78％)，容易腐败变质，通常作为废弃物直接丢弃，极少用来食用，只有部分被用作词料或肥料。因此，豆渣利用率低，其潜在营养价值未得到充分的开发利用，甚为可惜。然而，随着人们对食品营养需求的提升，对豆渣的研究也越来越深入。

目前，豆渣中蛋白质的提取方法通常主要是碱溶酸沉法。碱溶酸沉提取工艺是利用弱碱性水溶液浸泡低变性脱脂豆粕，使豆粕中可溶性蛋白质溶于弱碱性水溶液中，然后采用盐酸溶液滴加进入已溶解蛋白质的弱酸溶液中，调节其pH值到大豆蛋白的等电点(pH＝4.2-4.6)，使大豆蛋白质沉淀下来，最后通过过滤、溶解、中和、灭菌和喷雾干燥，得到粉末状大豆分离蛋白产品。采用碱溶酸沉法时，常规使用的酸液和碱液分别为HCl和NaOH，这两种试剂容易造成环境的污染。

2型糖尿病发病和进展的一个重要原因是胰岛功能的进行性衰退，包括β细胞胰岛素分泌缺陷和α细胞胰升糖素不适当的分泌增加造成的胰岛素与胰升糖素比例失调。胰升糖素样肽1(GLP-1)是一种在食物营养物质刺激下，由肠道内分泌细胞合成分泌的肠促胰素(Incretin)，具有葡萄糖依赖性促胰岛素分泌的特性，可通过促进β细胞的胰岛素分泌、抑制α细胞不适当的胰升糖素分泌、延缓胃排空及抑制食欲等多个途径参与机体血糖稳态调节。同时，GLP-1还可促进β细胞增殖、抑制β细胞凋亡，增加胰岛素合成、改善β细胞功能。

但内源性活性GLP-1半寿期极短，迅速被二肽基肽酶(DPP-IV)裂解而失活，不能达到2型糖尿病治疗浓度。DPP-IV抑制剂，可以选择性抑制DPP-IV活性，阻止内源性活性GLP-1裂解，延长其半衰期，提高其血浆水平和效能。

DPP-IV抑制剂通常为酮类化合物和哌嗪类化合物，均具有不同程度的毒副作用。此外，中国专利CN101029081中，公布了重组蛋白Exendin-4多肽具有DPP-IV抑制特性，该多肽通常采用化学合成法和基因工程菌发酵法来生产，工序繁琐，价格也比较昂贵，且产品稳定性也较差。

发明内容

本发明的目的在于：提供一种豆渣蛋白质的简易的提取方法及其用于制备DPP-IV抑制肽的方法。

为了实现上述目的，本发明提供：

一种豆渣蛋白质的提取方法，按如下步骤进行：

(1)将新鲜的豆渣按照料液比为1∶10～1∶100加入水，搅拌均匀；

(2)将豆渣液放置于30-50℃温度条件下，放置时间1.0～24h，在此过程中豆渣液的pH值不断降低，待pH值为3.0-5.0时，将豆渣液取出，室温下冷却降温，此时豆渣液分成三层，最上层为浅黄色漂浮物，中间层为水，最下层为析出的浅黄色蛋白质，采用玻璃容器将最上层的黄色漂浮物弃去；

(3)采用2-12层120目以上纱布过滤，除去水，收集纱布上残留的豆渣蛋白质，将豆渣蛋白质放置于室温自然晾干。

采用上述的豆渣蛋白质制备DPP-IV抑制肽的方法，按如下步骤进行：

(1)按料液比为1∶20～1∶200向豆渣蛋白质中加入水，调节pH值至1.5～10.0；

(2)按蛋白酶与加水之前的豆渣蛋白质比为1∶200～1∶20再加入蛋白酶，调节温度至20～60℃，进行水解反应0.5～6h，水解反应结束后，灭酶得到水解液；

(3)将水解液离心去除残渣，获得的上清液经干燥制得DPP-IV抑制肽粗品粉末；

(4)将DPP-IV抑制肽粗品粉末配成浓度为20-200mg/ml的溶液，然后经过膜分离或柱层析进行进一步的纯化得到DPP-IV抑制肽纯品。

所述的步骤(2)中所述的蛋白酶为胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰酶、酸性蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶、复合风味蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶、木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶中的一种或多种的复配。

所述的步骤(3)中干燥方式为冷冻干燥、真空干燥或喷雾干燥。