[发明专利]利用RNA吸附柱快速提取植物RNA的试剂盒及方法

说明书

技术领域

本发明提供一种利用RNA吸附柱快速提取植物RNA的试剂盒及方法，属于生物技术领域。

背景技术

核酸是生物遗传的物质基础，决定生物体的遗传、变异、生长和发育。在基因工程中，核酸分子是主要的研究对象，因此核酸的分离、提取是分子生物学研究中很重要的技术。从植物组织中提取RNA是进行植物分子生物学方面研究的必要前提，要克隆基因，或是简历cDNA文库，RT-PCR以及Northern杂交等都需要有高质量的RNA。因此，从植物组织中提取纯度高、完整性好的RNA是上述研究的关键所在。

RNA是一类极易降解的分子，要得到完整的RNA必须最大限度地抑制提取过程中内源性及外源性核糖核酸酶对RNA的降解。高浓度强变性剂硫氰酸胍，可以溶解蛋白质、破坏细胞结构，使核蛋白与核酸分离，失活RNAase，所以RNA从细胞中释放出来时不会被降解。细胞裂解后，除了RNA，还有DNA、蛋白质和细胞碎片，通过苯酚、氯仿等有机溶剂处理得到纯化、均一的总RNA。

在提取植物RNA的过程中，常由于提取时间过长，RNA酶污染等原因造成RNA降解，使得后续试验无法进行。因此，采用一种快速植物RNA的方法对于进行RNA的相关实验至关重要。

发明内容

本发明提供一种利用RNA吸附柱快速提取植物RNA的试剂盒及方法，利用该试剂盒能够快速获得纯度高、完整性好的RNA。

本发明首先提供了一种利用RNA吸附柱快速提取植物RNA的试剂盒，所述试剂盒的组成包括：

1)        裂解液：Trizol提取液；

2)        Buffer A：氯仿；

3)        Buffer B：70%重量比乙醇；

4)        去蛋白液：5M盐酸胍，20mM Tris-HCI pH6.6，38％重量比乙醇；

5)        漂洗液：20mM NaCL，2mM Tris-HCI pH7.5，80％重量比乙醇；

6)        RNA吸附柱。

所述Trizol提取液配制如下： 174ml solutionD、17.4 ml 0.2M Nacl（ph4.2-4.5）、174 ml 水饱和酚、34.8 ml 氯仿、1.2 ml 2-Mercaptoethaol（b-硫基乙醇），其中solutionD的配方如下：283.5g异硫氰酸胍、2.5g月桂酸、50ml 250mM柠檬酸钠（ph7.0），加DEPC处理水至500ml。

本发明还提供了一种利用所述试剂盒快速提取植物DNA的方法，依次包括以下步骤：

（1）        植物组织细胞的破碎：称取0.5g植物样品加入液氮研磨成粉状，将其迅速转入1.5ml离心管，加入1ml裂解液，振荡器震荡30秒后，加入200ul的Buffer A，振荡器震荡30秒；

（2）        RNA的吸附：将细胞破碎后的样品12000rpm/min离心10min，离心后将上清吸到1.5ml离心管，加入等体积的Buffer B，混匀后将样品加到RNA吸附柱上，12000rpm/min离心1min，倒掉液体，加入500ul去蛋白液，12000rpm/min离心1min，倒掉液体，加入500ul 漂洗液，12000rpm/min离心1min，倒掉液体，再加入500ul 漂洗液，12000rpm/min离心1min，倒掉液体，吹干后加入50ul DEPC水，12000 rpm/min离心2min，收集液体。

其中所述RNA吸附柱为硅胶膜RNA吸附柱，购自北京天恩泽公司。

常规的植物RNA提取方法步骤繁琐、费时长，容易造成RNA降解。本发明通过采用RNA吸附柱吸附RNA，同时使用去蛋白溶液和漂洗溶液去除蛋白等杂质，可以在较短时间内获得较高纯度的植物RNA。本发明能快速获得质量较高的植物RNA。

采用本发明所提供的方法具有突出的特点：

                      1.   降低了植物组织RNA的提取时间。

                      2.   提高了植物组织RNA的提取纯度和完整性。

附图说明

图1为植物组织RNA的提取检测结果图。泳道1，2，3，4,5分别代表利用本方法提取的水稻、玉米、甘蔗、花生、小麦组织RNA电泳结果图。

具体实施方式