[发明专利]植物叶片总RNA提取方法

权利要求书

1.植物叶片总RNA提取方法，其特征在于：

（1）植物叶片在液氮环境下研磨成细粉状，快速转移到含有细胞裂解液I的离心管中，混匀后加入盐-醇溶液混匀后，冰上静置10分钟，离心；

（2）转移上清液到含有细胞裂解液II的离心管中，混匀后加入盐-醇溶液混匀后，冰上静置10分钟，离心；

（3）转移上清液到新离心管中，经等体积的水饱和酚与氯仿组成的混合试剂抽提后，冰上静置10分钟，离心；

（4）取上清液，加入异丙醇沉淀，冰上静置10分钟，离心，加DEPC水溶解总核酸，再用DNA酶I溶液消化DNA；

（5）经等体积氯仿抽提，冰上静置10分钟，离心；

（6）转上清液到新的离心管，加入异丙醇沉淀，冰上静置10分钟，离心；

（7）用醇洗涤，再经空气干燥后，溶解在DEPC水中低温保存，

其中所述细胞裂解液I为以下配方的水溶液：

2 w/v% CTAB，

3 w/v% PVP，

0.1 mol/L Tris-HCl，pH 8.0和

25 mmol/L EDTA，pH 8.0；

所述细胞裂解液II为以下配方的水溶液：

2 w/v% SDS，

2 w/v% PVP，

25 mmol/L EDTA，pH 8.0和

0.1 mol/L Tris-HCl，pH 8.0，

细胞裂解液I和细胞裂解液II都调至pH 8.0；并且

所述盐-醇溶液为含有裂解液体积1/20-1/10的β-巯基乙醇、裂解液体积1/4-1/2的无水乙醇和裂解液体积1/4-1/2的3mol/L NaAc的水溶液；

其中所述提取方法无需使用低温离心机，并且离心的转速为12,000 rpm，时间5分钟；

其中所述细胞裂解液I和细胞裂解液II以500-800 μl细胞裂解液/0.1-0.3 g植物叶片的量加入。

2.如权利要求1所述的总RNA提取方法，其特征在于：DNA酶I溶液浓度为0.1-0.5 单位/μl，消化时间为10-60分钟。

3.如权利要求1所述的总RNA提取方法，其特征在于：步骤(4)和(6)中异丙醇的体积为上清液体积的1/2-2/3。

4.如权利要求1所述的总RNA提取方法，其特征在于：步骤(3)中水饱和酚与氯仿的体积比为1:1。

5.如权利要求1所述的总RNA提取方法，其特征在于：步骤(7)中醇为75%乙醇。