[发明专利]牛奶中人α-乳清蛋白筛查试纸条及制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明属于牛奶转基因成分的检测技术领域，具体涉及一种转人α-乳清蛋白筛查试纸条及其制备方法。本发明与免疫胶体金检测技术有关。

背景技术

转基因动物及转基因动物产品以其诱人的经济前景，显示出强大的生命力，其市场化将是不可扭转的时代趋势。然而，鉴于生物安全问题，转基因动物生产的各个环节都需受到严格的控制。因此，一套健全、科学、规范的安全评价体系是必不可少的。其中，可靠、准确的转基因检测方法是安全评价体系中的重环节。

在本发明申请以前，有资料报道中国农业大学已经成功研制出了一批转人α-乳清蛋白转基因奶牛及其他一些转基因奶牛。这标志着我国转基因奶牛新品种培育和动物乳腺生物反应器技术达到了国际先进水平，鉴于转人α-乳清蛋白基因奶牛生产技术的成熟以及其产品市场化的趋势，建立一种快速、简便的检测人α-乳清蛋白的方法，有很重要的必要性和紧迫性。

目前对于转基因成分的检测可从外源基因的核酸和蛋白质两个水平进行，从蛋白质水平进行转基因成分检测，具有必要性和可行性，这是因为：只有对目的蛋白质进行检测，才能反映外源基因的最终表达情况；对于生物反应器制得的蛋白产品，必须对蛋白质进行定性、定量以及生物活性分析；对蛋白质进行检测，蛋白质样品制样较核酸简单。诸多的蛋白质检测方法，大致可以分为4类：(1)基于蛋白质的物理化学特性的检测，如双向电泳、质谱、色谱等；(2)基于核酸与蛋白质之间的互作的检测，如邻位连接技术，是一种依赖于适配子(aptamer，能够特异地识别并结合蛋白质的DNA或RNA的总称)的检测技术(Mats G.,Simon F.,Michael T.,et al.A sense of closeness:protein detection by proximity ligation[J].Current Opinion in Biotechnology,2003,14:82-86；Simon F.,Mats G.,Jonas J.,et al.Protein detection using proximity-dependent DNA ligation assays[J].Nature,2002,20:473-477)；(3)基于蛋白质与蛋白质之间的互作的检测，如常用的免疫检测方法，包括western blot，dot blot(不需专门的仪器，但是操作繁琐，不适合做批量检测)，ELISA(灵敏度高、特异性强、简单快速、稳定性好、便于自动化检测等特点，应用性强)，以及免疫组织化学染色法(具有特异性强、灵敏度高、定位准确的特点，便于进行功能研究，但是操作复杂、假阳性率高)等；(4)将对蛋白质的检测转化为核酸的检测，如Bio-bar code assay，灵敏度高(Khan S,Klein W,Mirkin CA,et al.Fluorescent and scanometric ultrasensitive detection technologies with the bio-bar code assay for alzheimer’s disease[J].Nanoscape,2005,2(1):7-15)。上述提到的这些方法都比较费时费力，而且需要专业技术人员和专门的仪器设备，基本上只能在实验室完成，不便于基层推广。

胶体金免疫层析(gold-immunochromatography assay GICA)是20世纪80年代发展起来的一项新的免疫分析方式，是应用胶体金标记技术，以胶体金作为示踪物，应用于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。它具有简便，快速，特异性强，灵敏度高，费用低的优点。依据胶体金免疫层析技术，在转基因植物检测中，已经研制出了多种胶体金免疫层析快速检测试纸条。

鉴于转基因动物及其产品的应用前景，研发快速、灵敏、准确、安全、便捷的转基因动物及其产品的检测方法，为转基因动物安全评价及转基因动物的监测和监控提供技术支撑，对于转基因动物及其产品的安全管理具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种转人α-乳清蛋白筛查试纸条及其制备方法，本发明能准确快速检测出转基因牛奶中转人α-乳清蛋白(hLALBA)，不需要特殊设备，为基层检测人员提供一种快速简便的筛查牛奶中转人α-乳清蛋白基因的方法，本发明的方法同时也为转基因动物及其产品安全评价和管理提供借鉴。

本发明的总体技术路线图见图1所示。

本发明的技术方案如下：