[发明专利]金花茶皂苷A标准品及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于天然产物分离纯化领域，具体涉及一种从金花茶叶中提取金花茶皂苷A标准品及其制备方法。

背景技术

金花茶(Camellia chrysanth(Hu)Tuyama)是山茶科，山茶属，金花茶组，金花茶系植物。为常绿灌木或小乔木。主产于中国广西防城港市境内，金花茶是防城港市特色资源之一,素有“茶皇后”、“植物界大熊猫”的美誉，2009年防城港市防城区被命名为“中国金花茶之乡”，2010年被国家质量监督检验检疫局授权为国家地理标志保护产品，防城港市立足本地金花茶资源优势，扎实推进金花茶产业经济发展，促进农民增收。近年来金花茶产业发展取得了明显成效，人工种植金花茶面积达到3万亩，育苗300万株，有十几家企业利用金花茶花和叶研制有金花茶袋包茶、饮料、口服液等近30多个系列产品，产值达6个多亿。

在金花茶皂苷技术领域，申请人检索到如下两篇相关的技术文献：

文献1：题名：《金花茶叶皂苷类成分研究》，作者：苏琳,莫建光,韦英亮等；刊物：《中草药》，2012,43(5)，877-879。

该文献研究了金花茶Camellia&nbsp；euphlebia叶皂苷类成分。方法利用超声提取、大孔树脂富集以及制备色谱对金花茶叶水溶性部分进行分离纯化,运用NMR、MS、IR等光谱手段进行结构鉴定。结果分离得到3个单体化合物,分别为人参皂苷Rg1(1)、人参皂苷F1(2)和人参皂苷F5(3)。结论化合物1～3均为首次从该植物中分离得到的人参皂苷,其中人参皂苷Rg1、F5为首次从山茶属中分离得到。金花茶为国家一级保护的珍稀药用植物,这些成分的分离鉴定对其进一步的活性研究、开发利用和推广种植具有重要意义。但该文献分离得到的人参皂苷Rg1(1)、人参皂苷F1(2)和人参皂苷F5(3)三种化合物均是前人研究已经定性的化合物，其药理活性和用途已有很多报道。

文献2：题名：《金花茶皂甙的分离纯化及化学结构研究》；作者：曾秋文；刊物：广东海洋大学硕士论文，2010年。

该文献研究以金花茶叶为实验材料提取其中的皂甙成分,然后筛选分离纯化树脂,对皂甙进行分离纯化。通过抗氧化指标比较皂甙组分的抗氧化活性,并对抗氧化活性最高的皂甙组分进行进一步的分离纯化,分析其理化性质,为金花茶皂甙的构效关系研究提供理论依据。

研究的主要内容及结果如下:

1、以新鲜金花茶叶为原料,经过微波灭酶后进行组织破碎,采用超声波浸提及纳米超滤等方法进行提取和浓缩,得到金花茶浓缩液。金花茶浓缩液经过乙醇沉淀去杂、乙醚脱色得到粗皂甙提取液。试验结果显示金花茶粗皂甙提取液中主要含有皂甙并含有少量的茶多酚,皂甙含量约为茶多酚的10倍。

2、通过静态吸附率和解吸率等指标比较了聚酰胺树脂、XAD16、DM130和XAD1600等4种树脂对金花茶粗皂甙分离的效果,并选择XAD16作为分离树脂对金花茶粗皂甙进行分离纯化。分离纯化结果:在水以及10％、20％和30％异丙醇洗脱液处分别得到了WS、IS1、IS2、IS3等4个皂甙组分。各皂甙组分的得率分别为34.8％、9.1％、20.3％、31.8％,皂甙总得率达96.0％。高效液相色谱分析结果显示,相对于粗皂甙,各皂甙组分的吸收峰数量明显减少,表明XAD16大孔吸附树脂层析柱可以有效将金花茶粗皂甙分离出极性不同的皂甙组分。

3、以维生素C为参照物,通过羟基自由基清除试验、超氧阴离子清除试验、DPPH·自由基清除试验、磷钼络合物法等4种不同的抗氧化试验,比较了粗皂甙、WS、IS1、IS2、IS3等皂甙组分的抗氧化活性。结果显示,各皂甙组分均有明显的抗氧化活性,在清除羟基自由基实验中,IS1的清除率为66.5％,比维生素C及其他三个皂甙组分高；在DPPH·自由基清除试验中,IS1的清除率为96.3％,接近同浓度维生素C的清除率100％；在清除超氧阴离子的实验中,IS1的清除率达到64.7％,比皂甙组分IS2、IS3高；在磷钼络合物法实验中,IS1的抗氧化活性比皂甙组分IS2、IS3高37.1％、39.8％,可以看出IS1的抗氧化活性较为显著。