[发明专利]一种HPLC检测胱氨酸中酪氨酸含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及到分析化学领域，特别涉及到一种HPLC检测胱氨酸中酪氨酸含量的方法。

背景技术

L-胱氨酸具有促进人体细胞氧化还原、改善肝功能、促进白细胞增生、与毒物结合而起解毒等重要药理作用。临床上主要用于治疗慢性肝炎、膀胱炎、白细胞减少、各种秃发、放射性损伤及药物中毒。也是生产L-半胱氨酸的原料，L-胱氨酸经电解还原制成的半胱氨酸为重要的护肝解毒药， 能参与机体细胞的还原过程，调节人体肝脏内的磷脂代谢，保护已受损的肝实质细胞，促进肝脏生理功能旺盛，预防肝坏死。以L-半胱氨酸衍生的一系列药物，在临床上已得到了广泛的应用。在食品工业L-胱氨酸用于营养补强剂及奶粉的母乳化。电解L-胱氨酸制成的半胱氨酸可作为面包、天然果汁等软饮料的添加剂，肉食品和玉米食品加工用添加剂等。

此外，L-胱氨酸在化妆品、生化及营养学研究等领域也具有广泛的用途。随着科学技术的进步和应用研究的进展, 其应用范围必将越来越广,L-胱氨酸的分析结构如下：

        L-胱氨酸

L-胱氨酸的制备过程中，由于酪氨酸与胱氨酸的理化性质接近，胱氨酸和酪氨酸不易分开，因此需要严格控制胱氨酸中酪氨酸的含量，酪氨酸的结构式为：

            酪氨酸

目前中国药典、美国药典、欧洲药典中关于胱氨酸中酪氨酸含量的检测方法均为薄层色谱法，该方法检测灵敏度低，微量的酪氨酸很难检出。

发明内容

本发明的目的在于提供一种HPLC检测胱氨酸中酪氨酸含量的方法，从而保证胱氨酸的纯度，实现胱氨酸产品的质量控制。

为实现上述目的，本发明的技术方案为：

一种HPLC检测胱氨酸中酪氨酸含量的方法，所述的方法选用InertSustain C18 ，4.6×250mm，5μm色谱柱，流动相中水相—乙腈比例为90-97:10-3，水相用高氯酸调节pH值为2.0，流速：1.0mL/min，柱温：25-35℃，检测波长：225-235nm，进样体积：10-50μL。

所述的方法具体操作步骤如下：

1、配制酪氨酸对照品溶液：取酪氨酸对照品25mg放入25mL的量瓶中，加入浓度为0.5mol/L的盐酸溶液，超声波处理使25mg酪氨酸对照品完全溶解并定容至25mL刻度，摇匀，取0.5mL所配制的酪氨酸对照品盐酸溶液加入到50mL量瓶中，用浓度为0.1mol/L盐酸溶液稀释至50mL刻度，摇匀，配制成10μg /mL的酪氨酸对照品溶液；

2、配制胱氨酸样品溶液：取25-50mg胱氨酸样品放入25mL量瓶中，加入浓度为0.5mol/L盐酸溶液5mL，超声波处理使胱氨酸样品完全溶解，再用浓度为0.1mol/L的盐酸溶液稀释至25mL刻度，摇匀，配制成1-2mg/mL的胱氨酸样品溶液；

3、设置流动相流速为1.0mL/min，检测波长为225-235nm，柱温为25-35℃；

4、分别取步骤1或步骤2配制好的溶液10-50μL，分别注入高效液相色谱仪中，进行色谱分析，并记录色谱图。

本发明的积极效果为：

1、本发明采用新型的ODS/C18键合新型硅胶色谱柱（InertSustain C18，4.6×250mm，5μm），能够有效分离胱氨酸中酪氨酸，准确测定胱氨酸中酪氨酸含量；

2、本发明所述的方法能简便、快速、准确地分析胱氨酸中酪氨酸的含量，更好的控制胱氨酸的质量；

3、本发明的检测方法灵敏度到，相对检测限可以达到0.001%，理论板数在2000以上。

附图说明

图1：水相与乙腈的比例为95:5，柱温为25℃，酪氨酸对照品溶液的HPLC图；

图2：水相与乙腈的比例为95:5，柱温为25℃，胱氨酸样品溶液的HPLC图；

图3：水相与乙腈的比例为90:10，柱温为30℃，酪氨酸对照品溶液的HPLC图；

图4：水相与乙腈的比例为90:10，柱温为30℃，胱氨酸样品溶液的HPLC图；

图5：水相与乙腈的比例为97:3，柱温为35℃，酪氨酸对照品溶液的HPLC图；

图6：水相与乙腈的比例为97:3，柱温为35℃，胱氨酸样品溶液的HPLC图。

具体实施方式

下面结合实施例进一步说明本发明的具体实施方式。

实施例一：

1、仪器与条件