[发明专利]一种浓缩葡萄糖检测试剂冻干微球及其制备方法有效
申请号: | 201410437964.2 | 申请日: | 2014-08-30 |
公开(公告)号: | CN104198717A | 公开(公告)日: | 2014-12-10 |
发明(设计)人: | 张涛;黎海文;刘聪;周武平;蒋克明;郭振 | 申请(专利权)人: | 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所 |
主分类号: | G01N33/66 | 分类号: | G01N33/66 |
代理公司: | 安徽合肥华信知识产权代理有限公司 34112 | 代理人: | 余成俊 |
地址: | 215163 江*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 浓缩 葡萄糖 检测 试剂 冻干微球 及其 制备 方法 | ||
1.一种浓缩葡萄糖检测试剂冻干微球,其特征在于:其反应试剂和缓冲液组分及各组分重量配比为:
三乙醇胺缓冲液 100 mM -300mM,
ATP 4mM-8mM,
NADP 4mM-8mM,
己糖激酶 5KU/L-30KU/L,
6-磷酸葡萄糖脱氢酶 2KU/L-10KU/L,
防腐剂 1g/L-10g/L,
该试剂冻干微球的其他组分如冻干保护剂和冻干塑型剂等组成为:
聚乙二醇8000 10g/L-40g/L,
聚乙二醇20000 20g/L-60g/L,
海藻糖 5g/L-30g/L,
Trion X-100 1g/L-5g/L。
2.根据权利要求1所述的一种浓缩葡萄糖检测试剂冻干微球,其特征在于:所述反应试剂为缓冲液,可选用三乙醇胺缓冲液,或者Tris缓冲液,或柠檬酸-柠檬酸三钠缓冲液。
3.根据权利要求1所述的一种浓缩葡萄糖检测试剂冻干微球,其特征在于:所述冻干保护剂为糖类、聚合物、表面活性剂中的一种或几种,其中:
糖类优选海藻糖,或者蔗糖,糖类含量约为5g/L-30g/L;
聚合物优选聚乙二醇,或者聚乙烯吡咯烷酮,或者牛血清白蛋白,或者葡聚糖,聚合物含量约为30g/L-100g/L;
表面活性剂优选吐温80,或者吐温20,或者聚氧乙烯月桂醚,或者Trion X-100,表面活性剂含量约为1-10g/L。
4.根据权利要求1所述的一种浓缩葡萄糖检测试剂冻干微球,其特征在于:所述冻干塑型剂优选甘露醇,或者聚乙二醇,或者牛血清白蛋白,或者聚乙烯吡咯烷酮,聚乙二醇同时具有冻干塑型剂和保护剂作用。
5.根据权利要求1所述的一种浓缩葡萄糖检测试剂冻干微球,其特征在于:所述试剂中反应试剂和缓冲液组分为常规试剂反应试剂和缓冲液浓度的2-4倍。
6.一种浓缩葡萄糖检测试剂冻干微球制备方法,其特征在于:包括以下步骤:
(1)、配制葡萄糖检测试剂;
(2)、添加冻干保护剂和塑型剂,充分溶解后过滤除去不溶性物质,真空脱气去除气泡;
(3)、利用可精确定量的分液系统制备微滴,将液滴滴入液氮中,经液氮冷却后形成冷冻试剂微球;
(4)、将冷冻试剂微球转入冻干机中冷冻干燥后制备得到检测试剂冻干微球。
7.根据权利要求6所述的一种浓缩葡萄糖检测试剂冻干微球制备方法,其特征在于:所述步骤(3)中的液滴体积大小利用分液系统精确控制,液滴大小在2-10ul,大小误差在2%内。
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