[发明专利]一种早熟梨茎段的组织培养方法及培养基

说明书

技术领域

本发明属于植物细胞分子生物学领域，具体涉及梨茎段的组织培养方法及培养基。

背景技术

苏翠1号是优质早熟砂梨，亲本为华酥×翠冠，2003年杂交，2004年培养杂交苗，2011年通过江苏省农作物品种审定委员会品种认可(苏鉴果201107)。果肉白色，肉质细脆，石细胞极少或无，汁多味甜、风味好、品质佳。花芽易形成，连续结果能力强，坐果率高，果实成熟期为7月初。

苏翠2号也属于早熟砂梨，亲本为西子绿×翠冠，2003年杂交，2004年培养杂交苗，2011年通过江苏省品种审定。果实倒卵圆形，果皮黄绿色，无锈，果肉白色，肉质细脆，石细胞极少或无，花芽易形成，连续结果能力强，坐果率高，果实成熟期为7月中旬。

苏翠1号和苏翠2号采用常规的扦插方法进行繁殖时，繁殖系数低、高度杂合；采用常规的组培方法进行繁殖时，试管苗增殖系数低，平均生根率、平均根数较低，根长较短。

发明内容

本发明的目的是提供一种梨茎段的组织培养方法，该方法显著提高了试管苗的增殖率、增殖系数、生根率、平均根长和平均根数。

本发明的另一目的是提供用于梨茎段组织培养的培养基。

本发明的目的采用如下技术方案实现。

一种早熟梨茎段的组织培养方法，包括如下步骤：将外植体采用初始接种培养基进行诱导分化培养，得到初代组培苗；将所述初代组培苗用增殖培养基进行增殖培养，然后切取新稍转接入壮苗培养基进行继代培养，再依次转入生根培养基A和生根培养基B进行生根培养；

所述初始接种培养基是在1/2MS或AS基本培养基中添加6-BA、NAA和GA₃后得到的培养基，所述6-BA的终浓度为0.5-1.0mg/L，所述NAA的终浓度为0.05-0.5mg/L，所述GA₃的终浓度为0.2-3mg/L，所述初始接种培养基的pH为5.5-5.8；

所述增殖培养基是在MS培养基中添加6-BA、NAA和GA₃后得到的培养基，所述6-BA的终浓度为0.5～1.0mg/L，所述NAA的终浓度为0.1～0.2mg/L，所述GA₃的终浓度为0.5-3mg/L，所述增殖培养基的pH为5.5-5.8；

所述壮苗培养基是1/3MS培养基或1/4QL培养基，所述壮苗培养基的pH为5.5-5.8；

所述生根培养基A是在1/4QL培养基中添加IAA、6-BA和NAA后得到的培养基，所述IAA的终浓度为0.4-0.6mg/L，所述6-BA的终浓度为0.8-1.2mg/L，所述NAA的终浓度为0.05-0.15mg/L,所述的生根培养基的pH为5.5-5.8；

所述生根培养基B是1/4QL培养基。

在本发明中，所述初始接种培养基、增殖培养基、壮苗培养基、生根培养基A和生根培养基B中均添加有蔗糖和琼脂，所述蔗糖的终浓度为20～30g/L，所述琼脂的终浓度为5-7g/L。

在本发明中，所述初始接种培养基中的培养条件为：培养温度22～25℃，每天光照15-16h、黑暗8-9h，光照强度为1500-2000lx，每25-32d更换一次初始接种培养基。

在本发明中，所述增殖培养基中的培养条件为：培养温度22～25℃，每天光照15-17h、黑暗7-9h，光照强度为1500-2000lx，培养时间为25-32d。

在本发明中，所述壮苗培养基中的培养条件为：培养温度22～25℃，每天光照15-17h、黑暗7-9h，光照强度为1500-2000lx，每13-16天继代一次，继代次数为2-3次。

在本发明中，所述生根培养基A中的培养条件为：培养温度24～26℃，黑暗培养7-12天。

在本发明中，所述生根培养基B中的培养条件为：培养温度22～25℃，每天光照15-16h、黑暗8-9h，光照强度为1500-2000lx，培养时间为50-60天。

在本发明中，所述外植体为成龄母株茎段；优选为当年生带芽茎段。

在本发明中，所述外植体在诱导分化培养前进行如下处理：用羧苄青霉素水溶液浸泡所述外植体，然后采用含有爱力克^TMA、B和吐温20的溶液对所述外植体进行消毒。

本发明还要求保护用于早熟梨茎段组织培养的培养基，由如下培养基中的全部或部分组成：

(a)初始接种培养基；