[发明专利]一种早熟梨茎段的组织培养方法及培养基

权利要求书

1.一种早熟梨茎段的组织培养方法，其特征在于包括如下步骤：将外植体采用初始接种培养基进行诱导分化培养，得到初代组培苗；将所述初代组培苗用增殖培养基进行增殖培养，然后切取新稍转接入壮苗培养基进行继代培养，再依次转入生根培养基A和生根培养基B进行生根培养；

所述初始接种培养基是在1/2MS或AS基本培养基中添加6-BA、NAA和GA₃后得到的培养基，所述6-BA的终浓度为0.5-1.0mg/L，所述NAA的终浓度为0.05-0.5mg/L，所述GA₃的终浓度为0.2-3mg/L，所述初始接种培养基的pH为5.5-5.8；

所述增殖培养基是在MS培养基中添加6-BA、NAA后得到的培养基，所述6-BA的终浓度为0.5~1.0mg/L，所述NAA的终浓度为0.1~0.2mg/L，所述增殖培养基的pH为5.5-5.8；

所述壮苗培养基是1/3MS培养基或1/4QL培养基，所述壮苗培养基的pH为5.5-5.8；

所述生根培养基A是在1/4QL培养基中添加IAA、6-BA和NAA后得到的培养基，所述IAA的终浓度为0.4-0.6mg/L，所述6-BA的终浓度为0.8-1.2mg/L，所述NAA的终浓度为0.05-0.15mg/L,所述的生根培养基的pH为5.5-5.8；

所述生根培养基B是1/4QL培养基。

2.根据权利要求1所述早熟梨茎段的组织培养方法，其特征在于所述初始接种培养基、增殖培养基、壮苗培养基、生根培养基A和生根培养基B中均添加有蔗糖和琼脂，所述蔗糖的终浓度为20~30g/L，所述琼脂的终浓度为5-7g/L；优选的技术方案中，所述增殖培养基中添加有终浓度为0.5-3mg/L的GA₃。

3.根据权利要求1或2所述早熟梨茎段的组织培养方法，其特征在于所述初始接种培养基中的培养条件为：培养温度22~25℃，每天光照15-16小时、黑暗8-9小时，光照强度为1500-2000lx，每25-32天更换一次初始接种培养基。

4.根据权利要求3所述早熟梨茎段的组织培养方法，其特征在于所述增殖培养基中的培养条件为：培养温度22~25℃，每天光照15-17小时、黑暗7-9小时，光照强度为1500-2000lx，培养时间为25-32天。

5.根据权利要求4所述早熟梨茎段的组织培养方法，其特征在于所述壮苗培养基中的培养条件为：培养温度22~25℃，每天光照15-17小时、黑暗7-9小时，光照强度为1500-2000lx，每13-16天继代一次，继代次数为2-3次。

6.根据权利要求5所述早熟梨茎段的组织培养方法，其特征在于所述生根培养基A中的培养条件为：培养温度24~26℃，黑暗培养7-12天。

7.根据权利要求6所述早熟梨茎段的组织培养方法，其特征在于所述生根培养基B中的培养条件为：培养温度22~25℃，每天光照15-16小时、黑暗8-9小时，光照强度为1500-2000lx，培养时间为50-60天。

8.根据权利要求7所述早熟梨茎段的组织培养方法，其特征在于所述外植体为成龄母株茎段；优选为当年生带芽茎段。

9.根据权利要求8所述早熟梨茎段的组织培养方法，其特征在于所述外植体在诱导分化培养前进行如下处理：用羧苄青霉素水溶液浸泡所述外植体，然后采用含有爱力克^TMA、B和吐温20的溶液对所述外植体进行消毒。

10.用于早熟梨茎段组织培养的培养基，由如下培养基中的全部或部分组成：

（a）初始接种培养基；

所述初始接种培养基是在1/2MS或AS基本培养基中添加6-BA、NAA和GA₃后得到的培养基，所述6-BA的终浓度为0.5-1.0mg/L，所述NAA的终浓度为0.05-0.5mg/L，所述GA₃的终浓度为0.2-3mg/L，所述初始接种培养基的pH为5.5-5.8；

（b）增殖培养基；

所述增殖培养基是在MS培养基中添加6-BA、NAA后得到的培养基，所述6-BA的终浓度为0.5~1.0 mg/L，所述NAA的终浓度为0.1~0.2 mg/L，所述增殖培养基的pH为5.5-5.8；优选的技术方案中，所述增殖培养基中添加有终浓度为0.5-3mg/L的GA₃；

（c）壮苗培养基；

所述壮苗培养基是1/3MS培养基或1/4QL培养基，所述壮苗培养基的pH为5.5-5.8；

（d）生根培养基；

所述生根培养基包括生根培养基A和生根培养基B；

所述生根培养基A是在1/4QL培养基中添加IAA、6-BA和NAA后得到的培养基，所述IAA的终浓度为0.4-0.6mg/L，所述6-BA的终浓度为0.8-1.2mg/L，所述NAA的终浓度为0.05-0.15mg/L；

所述生根培养基B是1/4QL培养基。