[发明专利]一种基于G-四链体-氯血红素DNA酶的探针及其应用

权利要求书

1.一种基于G-四链体-氯血红素DNA酶的探针，其特征在于，所述探针包括一对邻位探针第一探针与第二探针、以及第一发夹与第二发夹；

所述第一探针包括：可特异性识别蛋白质的第一适配体区(Ⅰ)、可使所述第一探针与第二探针形成双链体的第一碱基互补区(Ⅲ)以及可与所述第一发夹部分杂交的第一DNA酶扩增区(Ⅳ)；

所述第二探针包括：可与所述第一发夹部分杂交的第二DNA酶扩增区(Ⅳ’)、可使所述第一探针与第二探针形成双链体的第二碱基互补区(Ⅲ’)以及可特异性识别蛋白质的第二适配体区(Ⅰ’)；

所述第一发夹的一端部为第一G-四链体序列区(Ⅴ)、并依次连接有可与所述第二发夹杂交的第一环部(Ⅷ)、可与所述第一探针和/或第二探针的DNA酶扩增区杂交且与端部的G-四链体序列部分杂交的第一茎干区(Ⅶ)、以及设置在另一端的第二G-四链体序列区(Ⅵ)；

所述第二发夹的一端部为第三G-四链体序列区(Ⅵ’)、并依次连接有可与所述第一环部杂交且与端部的G-四链体序列部分杂交的第二茎干区(Ⅷ’)、可与所述第一茎干区杂交的第二环部(Ⅶ’)、以及设置在另一端的第四G-四链体序列区(Ⅴ’)。

2.根据权利要求1所述的基于G-四链体-氯血红素DNA酶的探针，其特征在于，所述第一发夹的第一G-四链体序列区(Ⅴ)的序列为所述G-四链体序列的3/4段序列；所述第一发夹的第二G-四链体序列区(Ⅵ)的序列为所述G-四链体序列的1/4段序列；所述第二发夹的第三G-四链体序列区(Ⅵ’)的序列为所述G-四链体序列的1/4段序列；所述第二发夹的第四G-四链体序列区(Ⅴ’)的序列为所述G-四链体序列的3/4段序列。

3.根据权利要求1或2所述的基于G-四链体-氯血红素DNA酶的探针，其特征在于，所述第一发夹的第一G-四链体序列区(Ⅴ)具有如SEQ ID No.1所示的序列结构；所述第一发夹的第二G-四链体序列区(Ⅵ)具有如SEQ ID No.2所示的序列结构；所述第二发夹的第三G-四链体序列区(Ⅵ’)具有如SEQ ID No.3所示的序列结构；所述第二发夹的第四G-四链体序列区(Ⅴ’)具有如SEQ ID No.4所示的序列结构。

4.根据权利要求1-3任一所述的基于G-四链体-氯血红素DNA酶的探针，其特征在于，所述第一碱基互补区(Ⅲ)与所述第二碱基互补区(Ⅲ’)设置有6个碱基互补序列。

5.根据权利要求1-4任一所述的基于G-四链体-氯血红素DNA酶的探针，其特征在于，所述第一探针的第一适配体区(Ⅰ’)与所述第二探针的第二适配体区(Ⅰ)分别为同一蛋白质的不同适配体序列。

6.根据权利要求1-5任一所述的基于G-四链体-氯血红素DNA酶的探针，其特征在于，所述第一探针与所述第二探针的序列结构还包括多聚T序列(Ⅱ)；所述多聚T序列(Ⅱ)具有如SEQ ID No.5所示的序列结构。

7.根据权利要求6所述的基于G-四链体-氯血红素DNA酶的探针，其特征在于，所述多聚T序列(Ⅱ)的一端与所述适配体区连接，另一端与所述碱基互补区连接。

8.一种检测蛋白质的方法，其特征在于，利用权利要求1-7任一所述的基于G-四链体-氯血红素DNA酶的探针进行荧光检测。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：将权利要求1-7任一所述基于G-四链体-氯血红素DNA酶的探针置于待测溶液中，5-35℃下培育4-10h，然后向其中加入氯化血红素、2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐以及过氧化氢混匀反应，观察或检测混合液的发光或变色情况。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述基于G-四链体-氯血红素DNA酶的探针置于待测溶液中具体包括以下步骤：先将所述第一探针、所述第二探针部分置于待测溶液中，培育20-50min，再向其中加入所述第一发夹、第二发夹部分。

11.根据权利要求9或10所述的方法，其特征在于，加入氯化血红素的同时还加入氢离子缓冲液，所述缓冲液为4-羟乙基哌嗪乙磺酸溶液。