[发明专利]从乳汁中分离和培养奶牛乳腺上皮细胞的方法及专用培养基有效
| 申请号： | 201410412690.1 | 申请日： | 2014-08-20 |
| 公开（公告）号： | CN104178451A | 公开（公告）日： | 2014-12-03 |
| 发明（设计）人： | 孙东晓;谢岩;杨少华;崔晓钢 | 申请（专利权）人： | 中国农业大学 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 关畅;陈晓庆 |
| 地址： | 100193 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 乳汁 分离 培养 奶牛 乳腺 上皮细胞 方法 专用 培养基 | ||
1.一种从牛乳汁中分离和培养乳腺上皮细胞的方法，包括如下步骤：选择牛乳汁中体细胞数低于5×104个/ml并且处于泌乳中后期的牛，采集牛乳汁；分离并培养牛乳汁中的乳腺上皮细胞。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述分离并培养牛乳汁中的乳腺上皮细胞包括分离并培养原代牛乳腺上皮细胞，再将原代牛乳腺上皮细胞进行传代培养，得到传代的牛乳腺上皮细胞。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述原代牛乳腺上皮细胞和传代的牛乳腺上皮细胞培养时使用的培养基按照如下方法制备：将DMEM/DF12培养基和FBS按照体积比为9：1混匀，加入终浓度为1×的青霉素，终浓度为1×的链霉素，终浓度为5ug/mL的胰岛素，终浓度为5ug/mL的转铁蛋白，终浓度为5ug/mL的氢化可的松，终浓度为10ng/mL的表皮生长因子，终浓度为1ug/mL的孕酮，终浓度为10ng/mL的重组牛胎盘催乳素；
所述DMEM/DF12培养基购自Gibco，产品目录号为C11330500BT；
所述终浓度为1×的青霉素和终浓度为1×的链霉素的母液是浓度为100×的青霉素/链霉素双抗溶液；
所述浓度为100×的青霉素/链霉素双抗溶液的商品名称为青霉素/链霉素双抗溶液(100×)，购自Gibco，产品目录号为15140-122；
所述重组牛胎盘催乳素购自Prospec，产品目录号为CYT-511。
4.根据权利要求1-3任一所述的方法，其特征在于：所述牛为奶牛。
5.根据权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于：所述奶牛为荷斯坦牛。
6.一种培养基，按照如下方法制备：将DMEM/DF12培养基和FBS按照体积比为9：1混匀，加入终浓度为1×的青霉素,终浓度为1×的链霉素，终浓度为5ug/mL的胰岛素，终浓度为5ug/mL的转铁蛋白，终浓度为5ug/mL的氢化可的松，终浓度为10ng/mL的表皮生长因子，终浓度为1ug/mL的孕酮，终浓度为10ng/mL的重组牛胎盘催乳素；
所述DMEM/DF12培养基购自Gibco，产品目录号为C11330500BT；
所述终浓度为1×的青霉素和终浓度为1×的链霉素的母液是浓度为100×的青霉素/链霉素双抗溶液；
所述浓度为100×的青霉素/链霉素双抗溶液的商品名称为青霉素/链霉素双抗溶液(100×)，购自Gibco，产品目录号为15140-122；
所述重组牛胎盘催乳素购自Prospec，产品目录号为CYT-511。
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