[发明专利]小鼠维甲酸相关的孤核受体α腺相关病毒载体

权利要求书

1.一种小鼠维甲酸相关的孤核受体α腺相关病毒载体，其特征在于，所述载体为pZAC2.1-RORα，该载体含有小鼠基因RORα mRNA的CDS区序列。

2.根据权利要求1所述的一种小鼠维甲酸相关的孤核受体α腺相关病毒载体，其特征在于，所述载体基因组小，能感染分裂期及静止期细胞，整合到宿主细胞基因组的特定区域，无致病性且免疫原性弱。

3.一种小鼠维甲酸相关的孤核受体α腺相关病毒载体的构建方法，其特征在于，按照以下步骤进行：

（1）克隆小鼠RORα基因，应用PCR技术于小鼠的脑组织扩增出RORα mRNA的CDS区，于CDS区的上下游分别引入EcorI和XbaI酶切位点，将琼脂糖凝胶电泳并胶回收后的RORα片段和pMD18T克隆载体进行T-A克隆，转化大肠杆菌Stbl3并涂布于含有AMP的肉汤培养板进行AMP抗性筛选，挑取阳性菌于液体培养菌增菌培养，提取菌液中的质粒，PCR鉴定及测序正确后，该载体记为pMD18-T-RORα克隆载体；

（2）将pMD18-T-RORα以及PZAC2.1核心质粒进行EcorI和XbalI双酶切，再分别胶回收琼脂糖凝胶后的PZAC2.1的载体片段和RORα片段，在T4DNA连接酶的作用下连接过夜，同样转化stbl3并涂布于含有AMP的肉汤培养板进行筛选，挑选阳性菌落，次日取菌液按照菌液与培养基比例为1:100接种于的肉汤增菌培养，提取菌液中的质粒，PCR鉴定及测序正确后，该载体命名为pZAC2.1-RORα。

4. 一种小鼠维甲酸相关的孤核受体α腺相关病毒的包装方法，其特征在于，采用三质粒磷酸钙共沉淀法转染HEK293细胞，其中所述的三质粒分别为pZAC2.1-RORα、pAd-detaF6、p5E18。

5.  一种小鼠维甲酸相关的孤核受体α腺相关病毒的纯化方法，其特征在于，采用肝素琼脂糖亲和层析法分离纯化rAAV。