[发明专利]miRNA-26a的用途

说明书

技术领域

本发明属于基因工程和医学诊断领域，具体涉及一种miRNA的用途，更具体的涉及miRNA-26a在诊断肝癌方面的用途。

背景技术

原发性肝细胞癌是常见的消化道恶性肿瘤，在世界范围内是排名第五的恶性肿瘤，世界每年新发现恶性肿瘤病人约635万例，其中肝癌大约占26万例，26万例中42.5％发生在我国且其发病率仍然呈逐年递增的趋势。肝癌发现一般为晚期，有效的治疗方法为肝切除和肝移植，常规化疗对肝癌治疗效果并不明显，所以肝癌的早期诊断尤为重要，探索有效的肝癌临床诊断标记物和治疗策略具有重要意义。

Exosomes是一种纳米级的小囊泡状结构，存在于血液或其他生物体液中。它形成于众多细胞(包括树突状细胞和肿瘤细胞)的胞吐作用。Exosomes的外膜是由脂质双分子层组成，其成分包含有选择性蛋白、mRNA和miRNA。在Exosomes中包含有大于120种的miRNA，exosome中的miRNA可以影响干细胞变异(let-7)、器官形成(miR-1)、造血作用(miR-181)、肿瘤发生(miR-17、miR-18、miR-19a、miR-20、miR-19b-1、miR-93-1)以及新陈代谢。

miRNA是一类小的非编码的RNA，在细胞生长、发育、分化、死亡等生物过程中起着重要的作用，同时，miRNA几乎参与了血细胞生成、胰岛素分泌、神经系统构成和人类癌细胞生长等每一个生命活动的过程。序列分析表明，有1/3以上的人类基因直接受到miRNA的调控，而且越来越多的试验证据表明miRNA还有很多功能未被发现。miRNA具有肿瘤抑制因子及癌基因的作用，miRNA的失调与基因突变或表观遗传变异(包括缺失突变、扩增突变、点突变及DNA异常甲基化等)有关。miRNA表达情况与人类多种恶性肿瘤的发生、发展、诊断、预后相关。

发明内容

为了满足临床需求，本发明提供了一种与人类肝癌相关的血液miRNA标志物，所述标志物是exosome来源的miRNA-26a，其序列信息如SEQ ID NO.1所示。使用本发明的miRNA-26a标志物来进行肝癌的早期诊断，灵敏性和特异性均优于现有技术。

本发明还提供了与人类肝癌相关的血液miRNA标志物在制备诊断人类肝癌的试剂盒中的应用，所述标志物是exosome来源的miRNA-26a，其序列信息如SEQ ID NO.1所示。

本发明还提供了上述与人类肝癌相关的血液miRNA标志物的检测试剂。所述试剂包括QPCR实验中使用的反转录引物和/或扩增引物；所述反转录引物为Oligo(dT)特异性的RT引物；所述扩增引物的上游引物序列如SEQ ID NO.2所示，所述扩增引物的下游引物为通用反向引物。在本发明的一个具体的实施方案中，所述通用反向引物购自北京旷博生物技术有限公司。

本发明还提供了与人类肝癌相关的血液miRNA标志物的检测试剂在制备诊断人类肝癌的试剂盒中的应用，所述试剂包括QPCR实验中使用的反转录引物和/或扩增引物；所述反转录引物为Oligo(dT)特异性的RT引物；所述扩增引物的上游引物序列如SEQ ID NO.2所示，所述扩增引物的下游引物为通用反向引物。在本发明的一个具体的实施方案中，所述通用反向引物购自北京旷博生物技术有限公司。所述诊断试剂盒包含上述引物序列。

本发明还提供了一种诊断人类肝癌的试剂盒，所述试剂盒包含与人类肝癌相关的血液miRNA标志物的检测试剂，所述试剂包括QPCR实验中使用的反转录引物和/或扩增引物；所述反转录引物为Oligo(dT)特异性的RT引物；所述扩增引物的上游引物序列如SEQ ID NO.2所示，所述扩增引物的下游引物为通用反向引物。在本发明的一个具体的实施方案中，所述通用反向引物购自北京旷博生物技术有限公司。

优选地，本发明的诊断试剂盒还包含QPCR常用的试剂和酶，所述常用试剂包含PCR反应缓冲液、核糖核酸酶抑制剂、dNTP等；所述酶包含M-MLV逆转录酶、poly A多聚酶。还可以包括标准品和/或对照品。

具体来说，本发明解决技术问题的技术方案包括：

(1)建立统一标准的标本库和数据库，以标准操作程序采集符合标准的血液样本，系统收集完整的人口学资料和临床资料；

(2)血液中肿瘤源性exosome来源的miRNA差异表达谱分析：选择肝癌病例和肝脏良性疾病患者的血液样本，收集肿瘤源性exosome来源的miRNA，进行芯片分析，筛选差异表达的miRNA；

(3)对已筛选的差异表达miRNA在大样本人群中进行定量分析。