[发明专利]一种海洋细菌可湿性粉剂的制备方法及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种抗菌剂的制备方法，特别是一种海洋细菌活菌可湿性粉剂的制备方法，本发明还涉及该海洋细菌活菌可湿性粉剂的用途。

背景技术

水稻纹枯病(Rhizoctonia solanii)是我国水稻三大主要病害之一，一般发病田块能导致减产15%~ 20%，严重的可达60% ~ 70%，甚至绝收，严重威胁水稻的高产稳产。目前尚缺乏免疫和高抗品种，纹枯病的防治主要依靠井冈霉素，长期使用单一农药容易产生抗药性，甚至已出现了抗药性，生物防治已经成为水稻纹枯病防治研究的重点，国内外很多学者开展水稻纹枯病的生物防治研究，筛选出多个对纹枯病菌有较好防治效果的微生物菌株，有的已经用于生产。

由淮海工学院海洋学院实验室从连云港海域海泥中筛选出的海洋细菌GM-1菌株是解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens)，具有较强的抑菌作用，对9种植物病原菌均有很强的抑菌作用，而且在光照和紫外线照射下，GM-1菌株的稳定性良好，在pH值6～8的条件下，GM-1菌株的抗菌作用稳定，且对蛋白酶不敏感。GM-1菌株在以下公开出版物上均有记截：《油菜菌核病菌拮抗海洋细菌GM-1菌株的种类鉴定及抑菌作用研究》（《植物保护》2013，39（2）50－60）、《海洋解淀粉芽孢杆菌GM-1 培养基及摇瓶发酵条件优化》（作物杂志，2013.3）、《海洋解淀粉芽孢杆菌GM-1菌株发酵液抗菌谱及稳定性测定》（农药第51卷第10期，2012年10月）。

GM-1菌株具有广谱性和较强的稳定性，表现出良好的开发应用前景。但现在技术中还没有对其具体的应用进行研发，而该研发对对于减少化学农药的使用，避免井冈霉素抗药性的产生具有重要意义。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种抗菌效果好的、制备方法简单的海洋细菌可湿性粉剂的制备方法。

本发明所要解决的另一个技术问题是提供了前述海洋细菌可湿性粉剂的制备方法制得的海洋细菌可湿性粉剂的用途。

本发明所要解决的技术问题是通过以下的技术方案来实现的。本发明是一种海洋细菌可湿性粉剂的制备方法，其特点是，其步骤如下：

（1）海洋细菌GM-1菌株种子液的制备：将活化的海洋细菌GM-1菌株斜面菌种用2ml无菌水清洗下，配制成浓度为10⁹cfu/ml的菌悬液,接入到装有50mlPD培养基的250ml三角瓶中，28℃、180r/min摇床培养24h，即得种子液，调整浓度为为10⁹个细胞/mL作为种子液；

（2）发酵：用50L发酵罐对海洋细菌GM-1菌株进行发酵，制备海洋细菌GM-1菌株发酵液；发酵条件：装液量30L，接种量7%，种子液菌龄24h、浓度10⁹cfu/ml，温度28℃，搅拌速度200r/min，通气量3L/min，发酵时间36h；生物量达2.40×10¹⁰cfu/mL；得GM-1菌株发酵液；

（3）成品粉剂制备：按饱和吸附量向发酵好的GM-1菌株发酵液中加入载体硅藻土，每间隔1h搅拌一次，使载体充分吸附菌体，48h后GM-1菌体形成芽孢后，离心，沉淀置于60℃电热恒温鼓风干燥箱中烘干，即制得海洋细菌GM-1菌粉；最后将菌粉与稳定剂硬脂酸钙、分散剂聚乙烯醇、湿润剂十二烷基苯磺酸钠按重量比75：15：6：4进行混合，气流粉碎机粉碎，过300目筛，制备得到海洋细菌GM-1菌株可湿性粉剂。

本发明中所述的海洋细菌GM-1菌株在《油菜菌核病菌拮抗海洋细菌GM-1菌株的种类鉴定及抑菌作用研究》（《植物保护》2013，39（2）50－60）中已经公开，该菌株是为公知公用的材料，如公众需要，淮海工学院海洋学院实验室可以对外提供。