[发明专利]一种Fmoc-PNA-G(Bhoc)-OH的合成方法

权利要求书

1.一种合成Fmoc-PNA-G(Bhoc)-OH的合成方法，其特征在于所述的合成方法包括以下步骤：

步骤1）6-氯鸟嘌呤于DMF中加入碳酸钾，加热溶解，然后冷却溶液至-5℃，滴入溴乙酸苄酯，然后室温搅拌过夜，然后过滤，滤液倒水中，加入浓盐酸调pH为酸性，搅拌过滤产品，水洗，重结晶，旋干纯产品Ga；

步骤2）把Ga加入到-5℃的THF中，加入三光气搅拌，然后滴入DIEA，再加入二苯甲醇后室温过夜反应，然后加入乙醇，旋干溶液，然后用DCM溶解，用柠檬酸溶液洗，然后再用碳酸氢钠溶调pH为3得到粗产品，重结晶得到Gb；

步骤3）把NaH溶于THF中，溶液冷却到-30℃，然后滴入3-羟基丙腈，然后在0℃下搅拌反应，然后加入Gb，反应液室温过夜，用柠檬酸溶液调pH为3-4，过滤得到粗品，然后在甲醇中重结晶，旋干纯产品Gc；     

步骤4）将Gc、HBTU和N-(2-Fmoc-氨乙基)甘氨酸甲酯盐酸盐于DMF中，搅拌均匀后，滴加NMM，搅拌反应2h，倒入水中，得到产品Gd；

步骤5）将Gd于乙腈中冷却-30℃，滴加2M LiOH溶液，直到反应完全，用柠檬酸溶液调节pH为3-4，得到粗固体，二氯甲烷、甲醇硅胶柱（200-300目）得到99%纯度的产品Ge。

2.根据权利要求1所述的一种合成Fmoc-PNA-G(Bhoc)-OH的合成方法，其特征在于合成方法路线如下：

。

3.根据权利要求1所述的一种合成Fmoc-PNA-G(Bhoc)-OH的合成方法，其特征在于所述的步骤1）为：

把6-氯鸟嘌呤（50g，0.295mol）和碳酸钾（61g，0.44mol）加入到500ml的DMF中，加热溶液温度至84℃，直至6-氯鸟嘌呤全部溶解，然后冷却溶液至-5℃，滴入溴乙酸苄酯，滴完后该温度下再搅拌3小时，然后室温搅拌过夜，然后过滤，滤液倒入1.2L水中，加入浓盐酸调pH为3-4，搅拌2小时后过滤产品，水洗，乙腈重结晶，拉干产品得到68g，产率72.7%，HPLC=95%。

4.根据权利要求1所述的一种合成Fmoc-PNA-G(Bhoc)-OH的合成方法，其特征在于所述的步骤2）为：在-5℃条件下，把Ga（50g，0.158mol）加入到冰冷的500ml THF中，搅拌下加入三光气（160.8g，0.0566mol），然后搅拌1小时，然后滴入DIEA（44.2g，0.343mol），再搅拌30min，加入二苯甲醇（47.4g，0.2575mol）后室温过夜反应，然后加入乙醇，旋干溶液，然后用DCM溶解，用10%的柠檬酸洗，然后再用5%的碳酸氢钠溶液洗，旋出DCM，产品用甲醇重结晶后拉干得到68g产品，产率80%，HPLC=80%。

5.根据权利要求1所述的一种合成Fmoc-PNA-G(Bhoc)-OH的合成方法，其特征在于所述的步骤3）为：把NaH（11.36g，0.4735mol）加入到585ml THF中，溶液冷却到-30℃，然后滴入3-羟基丙腈（33.6g，0.4735mol），然后在0℃下搅拌2.5小时，然后加入Gb（50g，0.0947mol），反应液室温过夜，蒸去大部分溶液，加入适量水中，20%的柠檬酸调pH为3-4，过滤得到粗品，然后在甲醇中重结晶，拉干得到23g产品，产率58%，HPLC=92%。

6.根据权利要求1所述的一种合成Fmoc-PNA-G(Bhoc)-OH的合成方法，其特征在于所述的步骤4）为：将Gc(8.38g,0.02mol)、HBTU(9.09g,0.024mol)和N-(2-Fmoc-氨乙基)甘氨酸甲酯盐酸盐（7.8g,0.02mol）于DMF中，搅拌均匀后，滴加NMM(6.06g,0.06mol)，搅拌反应2h，倒入水中，得到产品Gd,层析法得到纯产品8.5g，收率56%，HPLC=97%。

7.根据权利要求1所述的一种合成Fmoc-PNA-G(Bhoc)-OH的合成方法，其特征在于所述的步骤5）为：将Gd(8.5g,0.011mol）溶于50ml乙腈中冷却至-30℃，滴加2M LiOH溶液，点板跟踪直到反应完全，用柠檬酸溶液调节pH为3-4，得到粗固体，过硅胶柱得到98%纯度的产品6.3g Ge，产率75%，HPLC=95%。