[发明专利]精子洗涤液及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于人工辅助生殖技术领域，涉及一种用于精子清洗的化学剂，尤其是一种精子洗涤液及其制备方法。

背景技术

目前人类不孕率提高促使试管婴儿技术的发展。在试管婴儿技术中首先需采集良好的精子，精子的优劣决定试管婴儿的成败。在试管婴儿技术中其精子来源主要有两方面：直接采集人体精子，或从精子贮藏库中提取。无论精子来源如何都必须使用清洗液对精子进行科学地洗涤，以收集活动能力较强、质量良好的精子，使精子获得足够的能量，同时除去精液中有害成份及死精子、炎细胞等。一方面保证冷冻贮藏的精液不变质、质量优良，另一方面在实施试管婴儿时对精液进行洗涤处理和筛选，保证培育优越的婴儿。

目前使用的清洗液(或洗涤液等)品种不统一，效果不明显，且价格昂贵。有些洗涤液中调配的营养不全，在清洗过程中容易造成精子的死亡或清子获能不足活力较低，如在精子活力实验中，精子保持活力的比率较低(同样的实验过程、同批次精液，下同)，其比率接近或低于合格标准(保持活力率≥75％)。有些洗涤液的稠度较高，在精洗过程难以一次性将精液中的有害成份、死精子和炎细胞去除，造成冷冻贮藏的精液质量不能得到保证。

另外，一般精子洗涤液在使用前不能直观地判断有效性的好坏，如果在洗涤液变质后仍继续使用将对实验或临床操作造成不可逆转的结果。

发明内容

本发明主要是解决精子清洗时更好地维持精子的活力、降低精子的死亡率等技术问题，以便更好的冷冻冷藏或为辅助生殖技术提供有力保证，避免风险发生。进而提供一种各项指标均达到体外清洗培养液的标准、有利精子生存、使用安全且易于判断该清洗培养液是否变质的精子洗涤液。

本发明的精子洗涤液，它是对多种溶质溶于超纯净水所配制的清洗培养液进行除菌而成；该多种溶质包括基础液溶质、杀菌剂和原液溶质；该基础液溶质包括氯化钠、氯化钾、硫酸镁、磷酸二氢钾、氯化钙、碳酸氢钠、4-羟乙基哌嗪乙磺酸、葡萄糖、丙酮酸钠、乳酸钠、丙氨酰谷氨酰胺、牛磺酸及非必需氨基酸；该原液溶质为人血清白蛋白；该杀菌剂为庆大霉素；该除菌是清洗培养液在超净工作台下利用0.2μm的滤膜进行过滤的过程。

进一步，该基础液溶质在清洗培养液中的含量如下：氯化钠92.815～102.585mmol/L，氯化钾4.465～4.935mmol/L，硫酸镁0.19～0.21mmol/L，葡萄糖2.66～2.94mmol/L，磷酸二氢钾0.3515～0.3885mmol/L，氯化钙1.9～2.1mmol/L，乳酸钠12.18～13.48mmol/L、丙酮酸钠0.3135～0.3465mmol/L、碳酸氢钠3.8～4.2mmol/L、丙氨酰谷氨酰胺0.95～1.05mmol/L、牛磺酸0.095～0.105mmol/L、4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)19.95～22.05mmol/L及非必需氨基酸9.5～10.5ml/L；该人血清白蛋白在清洗培养液中的含量为4.75～5.25g/L。

更进一步，该杀菌剂为庆大霉素，其在清洗培养液中的含量为9.5～10.5mg/L.

再进一步，该清洗培养液中还具有用以判断该清洗培养液pH值的指示剂；该指示剂为酚红，在清洗培养液中的含量为9.5～10.5mg/L。

进一步，该清洗培养液的pH值为7.20～7.40；该清洗培养液的渗透压为260～290mOsm/Kg。

更进一步，该非必需氨基酸为L-丙氨酸、L-天冬酰胺、L-天冬氨酸、L-谷氨酸、甘氨酸、L-脯氨酸、L-丝氨酸中的一种或者几种。

本发明的一种如上所述的清子洗涤液的制备方法，它包括以下步骤：

(1)、清洗培养液的配制：

a、先按照各溶质的含量和配制容量要求称取或量取各溶质，并分开放置；同时准备好带刻度调制容器和超纯净水，并将称量好的超纯净水加入调制容器中；

b、将除碳酸氢钠外的各基础液溶质按先固体后液体的顺序溶于调制容器内的超纯净水中；

c、向上述步骤b所得溶液中加入所量取的杀菌剂和所称取的NaHCO₃基础液溶质，同时根据需要添加指示剂，得基础液；

d、向上述步骤c所得基础液中加入所称取的人血清白蛋白，震荡或搅拌混合均匀，得原液；

e、检测上述步骤d所得的原液的渗透压和pH值，通过滴加2M的HCl溶液或2M的NaOH溶液调整其pH值至7.20～7.40，并记录最终渗透压和pH值

(2)、清洗培养液的处理：