[发明专利]精子洗涤液及其制备方法

权利要求书

1.一种精子洗涤液，它是对多种溶质溶于超纯净水所配制的清洗培养液进行除菌而成，该多种溶质包括基础液溶质、杀菌剂和原液溶质，其特征在于：该基础液溶质包括氯化钠、氯化钾、硫酸镁、磷酸二氢钾、氯化钙、碳酸氢钠、4-羟乙基哌嗪乙磺酸、葡萄糖、丙酮酸钠、乳酸钠、丙氨酰谷氨酰胺、牛磺酸及非必需氨基酸；该原液溶质为人血清白蛋白；该杀菌剂为庆大霉素；该除菌是清洗培养液在超净工作台下利用0.2μm的滤膜进行过滤的过程。

2.根据权利要求1所述的精子洗涤液，其特征在于：该基础溶质在清洗培养液中的含量如下：氯化钠92.815～102.585mmol/L，氯化钾4.465～4.935mmol/L，硫酸镁0.19～0.21mmol/L，葡萄糖2.66～2.94mmol/L，磷酸二氢钾0.3515～0.3885mmol/L，氯化钙1.9～2.1mmol/L，乳酸钠12.18～13.48mmol/L、丙酮酸钠0.3135～0.3465mmol/L、碳酸氢钠3.8～4.2mmol/L、丙氨酰谷氨酰胺0.95～1.05mmol/L、牛磺酸0.095～0.105mmol/L、4-羟乙基哌嗪乙磺酸19.95～22.05mmol/L及非必需氨基酸9.5～10.5ml/L；该人血清白蛋白在清洗培养液中的含量为4.75～5.25g/L。

3.根据权利要求2所述的精子洗涤液，其特征在于：该庆大霉素在清洗培养液中的含量为9.5～10.5mg/L。

4.根据权利要求3所述的精子洗涤液，其特征在于：该清洗培养液中还具有用以判断该清洗培养液pH值的指示剂；该指示剂为酚红，在清洗培养液中的含量为9.5～10.5mg/L。

5.根据权利要求4所述的精子洗涤液，其特征在于：该清洗培养液的pH值为7.20～7.40；该清洗培养液的渗透压为260～290m0sm/Kg。

6.根据权利要求2或3或4或5所述的精子洗涤液，其特征在于：该非必需氨基酸为L-丙氨酸、L-天冬酰胺、L-天冬氨酸、L-谷氨酸、甘氨酸、L-脯氨酸、L-丝氨酸中的一种或者几种。

7.根据权利要求6所述的精子洗涤液，其特征在于：该基础液溶质在清洗培养液中的含量如下：氯化钠92.815mmol/L、氯化钾4.465mmol/L、硫酸镁0.19mmol/L、葡萄糖2.66mmol/L、磷酸二氢钾0.3515mmol/L、氯化钙1.9mmol/L、乳酸钠12.18mmol/L、丙酮酸钠0.3135mmol/L、碳酸氢钠3.8mmol/L、丙氨酰谷氨酰胺0.95mmol/L、牛磺酸0.095mmol/L、4-羟乙基哌嗪乙磺酸19.95mmol/L及非必需氨基酸9.5ml/L；该人血清白蛋白在清洗培养液中的含量为4.75g/L。

8.根据权利要求6所述的精子洗涤液，其特征在于：该基础液溶质在清洗培养液中的含量如下：氯化钠97.7mmol/L、氯化钾4.70mmol/L、硫酸镁0.20mmol/L、葡萄糖2.80mmol/L、磷酸二氢钾0.37mmol/L、氯化钙2.0mmol/L、乳酸钠12.84mmol/L、丙酮酸钠0.33mmol/L、碳酸氢钠4.0mmol/L、丙氨酰谷氨酰胺1.0mmol/L、牛磺酸0.10mmol/L、4-羟乙基哌嗪乙磺酸21.0mmol/L及非必需氨基酸10ml/L；该人血清白蛋白在清洗培养液中的含量为5g/L。

9.根据权利要求6所述的精子洗涤液，其特征在于：该基础液溶质在清洗培养液中的含量如下：氯化钠102.585mmol/L、氯化钾4.935mmol/L、硫酸镁0.21mmol/L、葡萄糖2.94mmol/L、磷酸二氢钾0.3885mmol/L、氯化钙2.1mmol/L、乳酸钠13.48mmol/L、丙酮酸钠0.3465mmol/L、碳酸氢钠4.2mmol/L、丙氨酰谷氨酰胺1.05mmol/L、牛磺酸0.105mmol/L、4-羟乙基哌嗪乙磺酸22.05mmol/L及非必需氨基酸10.5ml/L；该人血清白蛋白在清洗培养液中的含量为5.25g/L。

10.一种如权利要求3～9任意项所述的清子洗涤液的制备方法，其特征在于：它包括以下步骤：

(1)、清洗培养液的配制：

a、先按照各溶质的含量和配制容量要求称取或量取各溶质，并分开放置；同时准备好带刻度调制容器和超纯净水，并将称量好的超纯净水加入调制容器中；

b、将除碳酸氢钠外的各基础液溶质按先固体后液体的顺序溶于调制容器内的超纯净水中；

c、向步骤b所得溶液中加入所量取的杀菌剂和所称取的NaHCO3溶质，同时根据需要添加指示剂，得基础液；

d、向步骤c所得基础液中加入所称取的人血清白蛋白，震荡或搅拌混合均匀，得原液；

e、检测步骤d所得的原液的渗透压和pH值，通过滴加2M的HCl溶液或2M的NaOH溶液调整其pH值至7.20～7.40，并记录最终渗透压和pH值。

(2)、清洗培养液的处理：

a、除菌，将上述的所得清洗培养液在超净工作台下利用0.2μm的滤膜过滤除菌；

b、分装及冷存，在无菌环境下对过滤后的清洗培养液进行分装、封口，并放置于冰箱或冷库内在2～8℃条件下保存，得精子洗涤液；

c、检验，取分装好的精子洗涤液进行检测；检测项目包括pH值检测、渗透压检测、细胞毒性检测、皮内刺激反应检测、致敏反应检测、无菌检测、热原检测、内毒素检测、体外鼠胚试验和精子活力试验，以判断该精子洗涤液是否合格。