[发明专利]高速逆流色谱法纯化那西肽的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种提取纯化那西肽的方法，具体的说涉及一种高速逆流色谱法纯化那西肽的方法。

背景技术

那西肽为动物专用抗生素，其抗菌作用机理是抑制细菌蛋白质合成而起抗菌作用。细菌对那西肽不易产生耐药性，与其他抗生素也无明显交叉耐药性。那西肽对革兰氏阳性菌，特别是葡萄球菌有较高的活性。那西肽毒性小，混饲给药在动物消化道中很少吸收，因而在动物性产品中残留少，主要用于促进畜禽生长。

那西肽分子式：

分子式：C51H43N13O12S6  

分子量：1222.37

性状：本品为浅黄绿褐色或黄绿褐色粉末，有特异气味

现有均采取湿法提取，再通过固液分离得到产品，技术问题主要在于总回收率低，只有50%-60%，提取过程中那西肽分解较多，得到那西肽产品的含量不高只能到70%。溶剂消耗比较大，对环境污染严重。

发明内容

本发明旨在克服现有技术的缺陷与不足，提供一种高效的提取纯化那西肽的方法，得到高纯度的那西肽精品。

本发明的目的通过以下技术方案来实现：

高速逆流色谱法纯化那西肽的方法，所述方法按如下步骤进行：(1)以那西肽干菌丝体为原料，采用四氢呋喃为提取溶剂，采用超声波提取方式进行提取若干次；（2）合并步骤（1）提取液，将提取液过氧化铝短柱，收集过柱液；（3）将步骤（2）的过柱液浓缩获得提取膏，所得提取膏利用高速逆流色谱法进行分离，紫外检测器在线检测，收集目标成分，减压干燥得到高纯度的那西肽。

作为优选，所述步骤（3）中高速逆流色谱法分离操作步骤为：取乙酸乙酯、甲醇、石油醚和水按照体积比1-5:1-7:1-3:1-7比例充分混合，静置分层，取上相注满高速逆流色谱管，以900-1100rpm转动主机，泵入下相做流动相，达到动态平衡后，流动相流速设置为1-5ml/min，用流动相溶解提取膏进样，根据图谱收集成分。

作为优选，所述步骤（1）中提取溶剂用量为那西肽干菌丝体质量的3-5倍/次，提取次数为2-3次，过柱液浓缩掉溶剂时浓缩12-20倍。

作为优选，所述步骤（2）中的氧化铝为中性氧化铝，粒度为200-300目。

作为优选，所述步骤（2）中浓缩采用真空浓缩，温度小于50摄氏度。

作为优选，所述步骤（3）中目标成分压干燥得到那西肽的干燥温度小于50摄氏度，真空度小于1000Pa。

本发明的有益效果：本发明对那西肽的提取纯化效率高，那西肽的回收率高，那西肽的纯度高。

具体实施方式

下面通过具体的实施例对本发明的技术方案做进一步的说明，实施例中所以试剂均系市购常规试剂。

那西肽菌丝，浙江汇能动物药品有限公司发酵获得。

中性氧化铝短柱：华东医药股份有限公司。

高速逆流色谱仪，江阴逆流科技有限公司，型号OptiChrome-1000。

实施例1

高速逆流色谱法纯化那西肽的方法，所述方法按如下步骤进行：那西肽菌丝体烘干后，取1000g（那西肽含量10%），加3倍量（3000ml）四氢呋喃溶剂超声波提取15分钟，过滤，再用3倍量（3000ml）四氢呋喃超声波提取15分钟，过滤，合并滤液，提取液过中性氧化铝短柱（粒度200-300目），过柱液减压真空浓缩12倍到500ml获得提取膏，浓缩温度小于或等于50摄氏度；

取乙酸乙酯，甲醇，石油醚，水按照1:3:1:3比例充分混合，静置分层，取上相注满高速逆流色谱管，以900rpm转动主机，泵入下相做流动相，达到动态平衡后，流动相流速设置为3ml/min，用流动相按照体积比10：1溶解提取膏进样，根据图谱收集成分；

回收试剂、减压干燥，真空干燥的真空度为800Pa，温度45摄氏度，直至蒸干溶剂得到那西肽83g，含量97.3%，回收率80.75%。

实施例2

高速逆流色谱法纯化那西肽的方法，所述方法按如下步骤进行：那西肽菌丝体烘干后，取1000g（那西肽含量10%），加5倍量（5000ml）四氢呋喃溶剂超声波提取15分钟，过滤，再用5倍量（5000ml）四氢呋喃超声波提取15分钟，过滤，合并滤液，提取液过中性氧化铝短柱（粒度200-300目），过柱液减压真空浓缩202倍到500ml获得提取膏，浓缩温度小于或等于50摄氏度。