[发明专利]一株产洛伐他汀的紫红曲霉突变菌株及其诱变和筛选方法

说明书

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，特别涉及一株高产洛伐他汀的紫红曲霉突变菌株及其诱变和筛选方法。 

背景技术

经查证，红曲发明在汉代，是传统的食品和中药材。五代人陶谷在《清异录》中有“红曲煮肉”的记载。历代多种本草，如《本草经解》、《本草从新》、《本草衍义补遗》、《本草纲目》、《本草备药》及《中药大辞典》对红曲均有记载。尤其明代李时珍《本草纲目》中对红曲的记载最为完整。综合历代本草，红曲性味甘温，无毒。归心、肝、脾、大肠经。具有活体化瘀，健脾消食、除湿祛痰功能，主治头晕、头痛、体胖多痰，心腹作痛、跌打损伤，妇女产后恶露不净等症状。红曲类产品已成为目前保健食品中辅助降血脂功能的主要产品。如CN103284060A就公开了一种含红曲霉菌和酒酿酵母的杂粮食品及其制备方法，可促进人体对营养物质的全面消化吸收，具有改善营养构成、平衡营养，益血补气、清理肠胃、清热解毒、利水消肿及促进消化等功效。 

红曲霉属于真菌界(Fungi)、真菌门(Eumycota)、子囊菌亚门(Ascomycotina)、不整囊菌纲(Plectomyhcetes)、散囊菌目(Eurtoitales)、红曲科(Monascaceae)、红曲菌属(Monascus Van.tiegh.)。中科院微生物菌种保藏管理委员会正式收集编目的红曲霉有10个种58个菌株。主要有：紫红红曲霉(M.purpureus)、安卡红曲霉(M.anka)、红色红曲霉(M.ruber)、巴克红曲霉(M.barken)、烟色红曲霉(W.uliginosus)、发白红曲霉(M.albidus)、锈色红曲霉(M.rubiginosus)、变红红曲霉(M.serorubesens)、橙色红曲霉(M.aurantiacus)、丛毛红曲霉(M.pilosus)等。 

红曲菌是腐生菌，嗜酸，特别是乳酸，因此常出现在乳酸自然发酵的物质中，如腐败的谷物，大曲等都是他们繁殖的场所。此外，在树枝上以及河流的淤积物中也有其出现。 

红曲生长适应的温度范围很广，一般温度15-42℃，最适温度为25-30℃， 生长的最适pH值3.5-5，可耐浓度高达10％的乙醇。 

20世纪70年代，日本科学家Endo等人首次从红色红曲霉M.rubber van Tieghem中分离出活性物质红曲可林(monacolin K)以来，日本、美国、韩国、中国等众多专家学者对红曲进行了广泛而深入的研究，取得了令人瞩目的成果。尤其是通过红曲霉代谢产物的成分分析及其活性研究，不断挖掘出生物活性物质及新化合物。 

微生物发酵生产功能性物质，首要的影响因素就是菌株产目标物质的能力。由于微生物变异快，因此微生物发酵工程一直受到制药人士的亲睐。但高效的诱变方法以及从众多的突变菌株中筛选出高产目的产物的菌株，一直是微生物诱变工作的难点。空间诱变技术作为紫红曲霉菌新的诱变手段具有诱变有益突变率高等显著特点，高效的筛选平台将大大提高筛选效率，缩短获得目的菌株的时间，对降低生产成本意义重大。 

发明内容

针对上述现有技术中存在的不足，本发明的目的在于提供一种高产洛伐他汀的紫红曲霉突变菌株,命名为红曲霉Monascus sp.，提供的菌株其发酵单位与出发株相比提高了40％。相应地还提供了上述突变菌株的诱变方法和筛选方法。 

一株产洛伐他汀的紫红曲霉突变菌株，其命名为红曲霉Monascus sp.，保藏编号为CGMCC No.9230。 

上述菌株在麦芽汁琼脂培养平板上，形态特征为：菌落表面绒毛状，平坦，边缘完整；菌丝体最初呈白色，随菌落的生长、发育而变化，逐渐呈现橘色至橘红色；背面边缘浅褐色，中央渐呈褐色；该菌株的生理生化特点为：生长温度范围比出发菌株更广，耐高温，45℃仍可正常生长，最适生长温度为25-30℃；生长的最适pH值3.5-5，可耐浓度高达10％的乙醇，耐高渗透压，在甘油含量25％的平板上仍可正常生长。 

一种上述产洛伐他汀紫红曲霉突变菌株的诱变方法，是先采用地面模拟诱变，然后进行空间诱变的的联合诱变方法。 

所述地面模拟诱变按如下步骤进行： 

(1)将出发菌株在接种在含有固体培养基的平板上进行培养，当菌株长满整个平板后待用；菌株平板的制作方式如下：1)准备麦芽汁琼脂20-80g；琼脂2-6g；水1000ml进行混合；2)在125℃下灭菌25min；3)每个平皿倒培养基20-30ml，30-33℃培养24小时无菌可以使用；4)将菌株接种上在28-35℃恒温培养，5-10天筛选出生长速度更快、颜色更深的菌株待用。