[发明专利]一种特异性结合甲胎蛋白核酸适配体的筛选方法

权利要求书

1.一种特异性结合甲胎蛋白核酸适配体的筛选方法，其特征在于，所述的筛选方法包括以下步骤：设计并构建大容量随机寡核苷酸文库以及用于PCR扩增的上游引物和下游引物，通过以毛细管电泳为基础的SELEX方法，富集能与甲胎蛋白结合的寡核苷酸，最终经克隆、测序以及验证后得到与甲胎蛋白特异性结合的寡核苷酸，即适配体。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的随机寡核苷酸文库以及上、下游引物序列为：

核苷酸文库的序列如SEQ ID NO.1所示；

物的序列如SEQ ID NO.2所示；

物的序列如SEQ ID NO.3所示。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的以毛细管电泳为基础的SELEX方法包括以下步骤：随机寡核苷酸文库与甲胎蛋白共同孵育，混合物进行毛细管电泳，收集与甲胎蛋白结合的寡核苷酸，常规PCR扩增，制备单链DNA文库，文库纯化后用于下一轮筛选。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述常规PCR条件为：94 ℃，3 min；94 ℃，30 s，58 ℃，30 s，72 ℃，30 s，扩增10个循环；72 ℃，5 min。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述单链DNA文库制备方法包括以下步骤：在链霉亲和素偶联的磁珠中加入常规PCR扩增产物，常温孵育，通过双链DNA上的生物素与磁珠上的链霉亲和素的相互作用将双链DNA吸附到磁珠表面，洗涤磁珠后加入碱液，常温变性，含有单链DNA的上清液用弱酸中和，产物PAGE切胶纯化。

6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的SELEX筛选的次数为4次。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的磁珠与PCR产物的孵育时间控制在20-30 min，碱变性时间控制在5-10 min。