[发明专利]一种从红豆杉枝叶或树皮中分离纯化紫杉醇的方法

说明书

技术领域

本发明属于天然药物提取技术领域。更具体地，涉及一种从红豆杉枝叶或树皮中分离纯化紫杉醇的方法。

背景技术

南方红豆杉（Taxus chinensis var. Mairei），又称美丽红豆杉，为裸子植物门（Gymnospermae）、红豆杉科（Taxaceae）、红豆衫属（Taxus）植物。它作为红豆杉属植物中分布最广泛的一种，主要分布于长江流域、南岭山脉山区等地，是我国生产抗癌药物紫杉醇（Taxol）的主要树种。紫杉醇是红豆杉属植物特有的次生代谢产物，它是最具抗癌活性的天然化合物之一，也是目前国际市场上最热门的新型抗癌药物。紫杉醇的作用机理为促进微管蛋白聚合抑制解聚，保持微管蛋白稳定，抑制细胞有丝分裂，主要用于治疗肺癌、白血病、前列腺癌、子宫癌等肿瘤疾病及艾滋病。然而，紫杉醇在红豆杉属植物中的含量相当低（占树皮干重的0.01%~0.06%左右），而红豆杉植物中含有许多与紫杉醇结构相似的其它紫杉烷（Taxanes）。由于这些紫杉烷类化合物在化学结构和极性等方面都同紫杉醇极为相似，导致紫杉醇的分离比较困难，分离纯化工艺复杂。

目前紫杉醇的分离纯化方法主要有：（1）柱层析法，但操作比较复杂，效率不高，而且需要不同填料结合使用；（2）制备型高效液相色谱法，对设备和试剂要求高，成本较高，难以规模化生产；（3）高速逆流色谱法，需要进行大量实验选择合适的溶剂系统；（4）超临界流体萃取法，设备成本高，提取得到的化合物纯度较低。

因此，研究出一套简单可行的分离纯化方案对提高植物中紫杉醇的利用率具有非常重要的意义。

紫杉醇的结构式如下：

。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有紫杉醇分离纯化技术的缺陷和不足，提供一种操作简便、成本低、重复性好、效率高、所得紫杉醇纯度高（纯度>98.5%）的分离纯化方法。

本发明的目的是提供一种从红豆杉枝叶或树皮中分离纯化紫杉醇的方法。

本发明上述目的通过以下技术方案实现：

本发明提供了一种包括碱性氧化铝柱层析、部分沉淀、快速制备色谱3个主要步骤的分离制备紫杉醇的方法：红豆杉枝叶或树皮粉碎后先用甲醇超声提取或回流提取，减压浓缩，经有机溶剂萃取得到浸膏，以浸膏为原料，经过碱性氧化铝柱分离后得到富含紫杉醇的组分，再通过以甲醇-水为体系的一步沉淀得到紫杉醇粗品，最后以快速制备色谱为分离手段，以甲醇-水为洗脱体系，得到紫杉醇纯品（纯度>98.5%），具体步骤为：

S1.原料处理

S1.1.红豆杉枝叶或树皮粉碎后过24目筛；

S1.2.步骤S1.1.所得粉末以1：5～20 (g/mL)的料液比，用甲醇作为提取溶剂，超声提取或回流提取，过滤；

S1.3.步骤S1.2.重复1～3次，合并滤液；滤液60℃以下减压浓缩，得到浸膏，浸膏超声分散在水中，用石油醚进行萃取；

S1.4.静止分层后获得水层，水层以乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯层减压浓缩至干，得到乙酸乙酯浸膏；

S2.碱性氧化铝柱层析

S2.1.层析用碱性氧化铝190℃干燥6 h后，置干燥器中放至室温，用二氯甲烷溶液浸泡，超声脱气5 min，装柱，平衡；

S2.2.乙酸乙酯浸膏用二氯甲烷溶解至浓度为100～250 mg·mL^-1，离心取上清液，得到样品溶液；

S2.3.清洗柱后上样，以甲醇体积浓度为2%～5%的二氯甲烷-甲醇为洗脱剂除去未被吸附的杂质，流速为3～5mL·min^-1，洗脱50 min；

S2.4.再以甲醇体积浓度为5%～10%的二氯甲烷-甲醇溶液为洗脱剂洗脱紫杉醇，流速为3～5 mL·min^-1，洗脱30 min，收集洗脱液，60℃以下减压浓缩得到富含紫杉醇的组分1；

S3.部分沉淀法处理：将组分1以5～10：1( mg/mL)的料液比，用45%～55%的甲醇-水溶液超声溶解后，过滤，再-20℃～10℃放置沉淀24～72 h后过滤，得到紫杉醇粗品；

S4.快速制备液相色谱分离

S4.1.色谱柱预处理：选择制备型中低压液相色谱柱，以体积浓度为50%～75%的甲醇-水溶液为洗脱体系溶液平衡色谱柱；

S4.2.进样：步骤S3获得的紫杉醇粗品加入体积浓度70%～90%的甲醇-水溶解，得浓度为100～250 mg·mL^-1的样品溶液，离心，取上清，得到样品溶液，进样体积为1～5 mL；