[发明专利]一种从红豆杉枝叶或树皮中分离纯化紫杉醇的方法

权利要求书

1.一种从红豆杉枝叶或树皮中分离纯化紫杉醇的方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1.原料处理：将粉碎的红豆杉材料过筛，用甲醇浸泡，超声或回流提取后，经减压浓缩得到浸膏；浸膏依次用石油醚和乙酸乙酯进行萃取，得到乙酸乙酯浸膏；

S2.碱性氧化铝柱层析：乙酸乙酯浸膏用二氯甲烷溶解后，利用碱性氧化铝柱层析；以二氯甲烷-甲醇溶液为洗脱剂，洗脱液经减压浓缩得到富含紫杉醇的组分1；

S3.部分沉淀法处理：将组分1以5～10：1 mg/mL的料液比，用45%～55%的甲醇-水溶液超声溶解，过滤，再-20℃～10℃放置沉淀24～72 h后过滤，得到紫杉醇粗品；

S4.快速制备液相色谱分离：

S4.1.色谱柱预处理：以体积浓度为50%～75%的甲醇-水溶液为洗脱体系溶液平衡制备型中低压液相色谱柱；

S4.2.进样：步骤S3获得的紫杉醇粗品加入体积浓度70%～90%的甲醇-水溶解，得浓度为100～250 mg·mL^-1的样品溶液，离心，取上清，得到样品溶液，进样体积为1～5 mL；

S4.3.洗脱：以体积浓度为50%～75%的甲醇-水溶液为洗脱体系溶液洗脱色谱柱，流速控制在8～15 mL·min^-1，收集洗脱液；

S4.4.洗脱液经减压浓缩和真空干燥，得到紫杉醇固体。

2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S1所述过筛是过24目筛；步骤S1所述料液比为1：10～20 g/mL；所述超声的时间为0.5～2 h。

3. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S2的具体操作如下：

S2.1.层析用碱性氧化铝190℃干燥6 h后，置干燥器中放至室温，用二氯甲烷溶液浸泡，超声脱气5 min，装柱，平衡；

S2.2.乙酸乙酯浸膏用二氯甲烷溶解至浓度为100～250 mg·mL^-1，离心取上清液，得到样品溶液；

S2.3.清洗柱后上样，以甲醇体积浓度为2%～5%的二氯甲烷-甲醇溶液为洗脱剂除去未被吸附的杂质，流速为3～5mL·min^-1，洗脱50 min；

S2.4.再以甲醇体积浓度为5%～10%的二氯甲烷-甲醇溶液为洗脱剂洗脱色谱柱，流速为3～5 mL·min^-1，洗脱30 min，收集洗脱液，60℃以下减压浓缩得到富含紫杉醇的组分1。

4. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S3所述部分沉淀法处理是将组分1以8.9：1 mg/mL的料液比，用48.1%的甲醇-水溶液超声溶解后，过滤，再-20℃放置沉淀48.7 h后过滤。

5. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S4.1.所述制备型中低压液相色谱柱为C₁₈键合相填料；色谱柱填料平均粒径为30～60μm；所述甲醇-水溶液的用量为柱体积的5～10倍。

6. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S4.3.的洗脱过程采用在线双波长紫外检测，自动收集洗脱液，紫外检测波长为227 nm和254 nm；步骤S4.4.所述真空干燥的温度为30℃～60℃，优选温度为30℃～35℃。