[发明专利]一种茄子黄萎病苗期快速抗性测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及茄子黄萎病抗性测定方法，尤其涉及茄子黄萎病的苗期快速抗性测定方法。

背景技术

茄子是我国乃至世界广泛种植的蔬菜作物。随着种植面积逐年增加，茄子病害也呈明显上升趋势，病害已成为制约茄子栽培中优质、高产的关键因素。茄子黄萎病是生产上的主要病害，由大丽轮枝孢(Verticillium dahliae Kleb)引起，为一种世界性土传性维管束病害。常年造成的产量损失在20％左右，重者可达70％，甚至绝收，严重影响了茄子的产量和品质。对茄子黄萎病的防治，常用的化学防治方法不但效果不理想，还造成严重的农残污染。张军民等(2004年)报道了采用嫁接可以在一定程度上减轻茄子黄萎病的发生，但嫁接费工、费时。生产实践证明，选育和种植抗病品种是防治茄子黄萎病经济、有效、安全的措施。而茄子品种的抗病性测定是选育抗病品种必不可少的关键技术，准确测定不同茄子品种的抗病性有助于更好地利用现有茄子品种，对筛选抗源材料、选育抗病品种具有重要意义。

作物病害的抗性测定评价方法有自然感病病圃测定和人工接种病圃测定两种。自然感病病圃测定不需要人工接菌，具有操作方法简便的优点，但病圃一般发病不均匀、测定所需时间长；人工接种测定以其具有方法标准、发病快速、测定时间短、测定结果准确等特点，被育种者和植保工作者广泛采用。茄子黄萎病的侵染源主要有带菌土壤、病残体，病原菌从茄子的根部伤口、幼根表皮及根毛侵入。根据该特点，近年有人分别采用苗期孢子悬浮液浸泡幼苗根系接种测定、土壤接菌测定方法进行茄子黄萎病抗性测定，但前者因需将浸染苗放入装有孢子悬浮液的三角瓶中，造成测定成本高、仅适合少量材料的测定；后者虽然能大批量筛选测定材料，但由于整个测定过程均在田间进行，茄苗的发病程度易受大田气候环境的影响，测定结果误差大，重复性、一致性差。

发明内容

本发明的目的是提供一种茄子黄萎病的苗期快速抗性测定方法。该方法操作简便、易于掌握、测定快速，适宜进行大量茄子材料的黄萎病抗性的测定筛选；且对茄子黄萎病抗性的测定结果准确、一致性好。

本发明实现其发明目的所采用的技术方案是，一种茄子黄萎病苗期快速抗性测定方法，其步骤依次为：

A、茄子黄萎病接种体的制备

将分离纯化的保藏登记号为CGMCC NO.8959的大丽轮枝菌(Verticillium dahiae)菌株EV8，转移到PDA斜面培养基上，于25℃的培养箱中培养7～10天；再转移到米饭培养基中，25～28℃恒温振荡培养8～10天，即得含大丽轮枝菌EV8孢子的茄子黄萎病接种体。

B、茄苗的培育

B1、种子处理

将待测茄子品种的种子放入容器内，再将50～55℃清水倒入容器淹没种子，将种子浸泡10～20分钟，再用温度为30℃的温水浸泡9～10小时；随后，取出种子，用湿布包好，放置在25～28℃的培养箱中催芽至种子露白。

B2、茄苗培育

将B1步得到的种子播种于基质中含有蛭石的营养钵中，营养钵的规格为(7～10)cm×(7～10)cm；将营养钵置于温度为25～28℃、自然光照下的温室内进行培养，使一个营养钵中长出一株二叶一心的茄苗。

C、病原菌接种

C1、伤根处理

将B2步的茄苗从营养钵内连同基质一并取出，用已消毒的剪刀将剪掉根尖，剪掉的根尖长度0.7～2.0cm。

C2、接种

将A步得到的接种体用已消毒的双层纱布过滤，得到的孢子悬浮液在显微镜下用血球计数板统计大丽轮枝菌EV8的孢子数量，并用无菌水将孢子悬浮液的孢子浓度调至(3.0～10.0)×10⁷个/ml。

再将C1步伤根处理后的茄苗根部连同基质一并放入孢子悬浮液中浸泡8～15秒，随后将茄苗连同基质重新置入营养钵中，一个营养钵内置入茄苗一株茄苗；并向每一营养钵的孔内灌入孢子悬浮液10～15ml，即完成病原菌的接种。

D、病情指数的测定

将接种病原菌后的茄苗及营养钵置于18～28℃的日光温室内培养15～20天，根据茄苗的黄萎病发生情况，按以下分级标准逐株确定发病等级：

0级：健株，叶片无症状；1级：有25％及以下的叶片表现症状，即叶片出现叶肉变黄或呈现不规则形的黄色病斑；2级：病株叶片25％～50％显症状，病斑颜色大部分变成黄色或黄褐色，叶片边缘略有卷枯；3级：病株叶片50％～75％以上表现症状，有少数叶片凋落；4级：病株叶片75％以上表现症状，多为褐色掌状枯斑，叶片有的脱落成光杆，以致整株枯死。