[发明专利]一种茄子黄萎病苗期快速抗性测定方法

权利要求书

1.一种茄子黄萎病苗期快速抗性测定方法，其步骤依次为：

A、茄子黄萎病接种体的制备

将分离纯化的保藏登记号为CGMCC NO.8959的大丽轮枝菌(verticillium dahiae)菌株EV8，转移到PDA斜面培养基上，于25℃的培养箱中培养7～10天；再转移到米饭培养基中，25～28℃恒温振荡培养8～10天，即得含大丽轮枝菌EV8孢子的茄子黄萎病接种体；

B、茄苗的培育

B1、种子处理

将待测茄子品种的种子放入容器内，再将50～55℃清水倒入容器淹没种子，将种子浸泡10～20分钟，再用温度为30℃的温水浸泡9～10小时；随后，取出种子，用湿布包好，放置在25～28℃的培养箱中催芽至种子露白；

B2、茄苗培育

将B1步得到的种子播种于基质中含有蛭石的营养钵中，营养钵的规格为(7～10)cm×(7～10)cm；将营养钵置于温度为25～28℃、自然光照下的温室内进行培养，使一个营养钵中长出一株二叶一心的茄苗；

C、病原菌接种

C1、伤根处理

将B2步的茄苗从营养钵内连同基质一并取出，用已消毒的剪刀剪掉根尖，剪掉的根尖长度0.7～2.0cm；

C2、接种

将A步得到的接种体用已消毒的双层纱布过滤，得到的孢子悬浮液在显微镜下用血球计数板统计大丽轮枝菌EV8的孢子数量，并用无菌水将孢子悬浮液的孢子浓度调至(3.0～10.0)×10⁷个/ml；

再将C1步伤根处理后的茄苗根部连同基质一并放入孢子悬浮液中浸泡8～15秒，随后将茄苗连同基质重新置入营养钵中，一个营养钵内置入茄苗一株茄苗；并向每一营养钵的孔内灌入孢子悬浮液10～15ml，即完成病原菌的接种；

D、病情指数的计算

将接种病原菌后的茄苗及营养钵置于18～28℃的日光温室内培养15～20天，根据茄苗的黄萎病发生情况，按以下分级标准逐株确定发病等级：

0级：健株，叶片无症状；1级：有25％及以下的叶片表现症状，即叶片出现叶肉变黄或呈现不规则形的黄色病斑；2级：病株叶片25％～50％显症状，病斑颜色大部分变成黄色或黄褐色，叶片边缘略有卷枯；3级：病株叶片50％～75％以上表现症状，有少数叶片凋落；4级：病株叶片75％以上表现症状，多为褐色掌状枯斑，叶片有的脱落成光杆，以致整株枯死；

再根据各株茄苗的发病等级计算出待测茄子品种的病情指数，病情指数＝[Σ(各级病株数×相应病级数)/总株数×4]×100；

E、抗性型的确定

根据D步得到的病情指数，确定出待测茄子品种的抗性型，即：

病情指数＝0，则待测茄子品种的抗性型为免疫；

0＜病情指数≤10.00，则待测茄子品种的抗性型为高抗；

10.00＜病情指数≤20.00，则待测茄子品种的抗性型为抗；

20.00＜病情指数≤35.00，则待测茄子品种的抗性型为中抗；

35.00＜病情指数≤50.00，则待测茄子品种的抗性型为感；

50＜病情指数，则待测茄子品种的抗性型为高感。

2.根据权利要求1所述的茄子黄萎病苗期快速抗性测定方法，其特征在于：所述的A步中的PDA斜面培养基的原料组成及质量配比为马铃薯200～210份、琼脂17～25g、蔗糖20份、水1000～1300份；米饭培养基的原料组成及质量配比为米50份，水800～1200份。

3.根据权利要求1所述的茄子黄萎病苗期快速抗性测定方法，其特征在于：所述的B1步的营养钵的基质的原料组成及质量配比为蛭石5～6份、沙土5～4份。