[发明专利]同时提高小球藻中叶绿素和蛋白质含量的高密度培养方法

权利要求书

1.一种同时提高小球藻中叶绿素和蛋白质含量的高密度培养方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将活化后的小球藻进行连续光照培养，使其处于对数生长期；

(2)将步骤(1)中处于对数生长期的小球藻培养液作为种子液，将其接入异养发酵容器中在黑暗条件下进行异养培养，培养温度为28～35℃，培养时间为3～5天，异养发酵容器中所用培养基其碳氮比为28.4～113.4；

(3)将经过步骤(2)培养获得的小球藻培养液稀释至小球藻细胞密度为10～20g/L，向小球藻培养液中加入氮源，使小球藻培养液中含有14.7～88.2mmol/L的氮元素，再对小球藻进行光诱导培养，培养温度为28～35℃，培养时间为1～3天。

2.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，步骤(2)中，异养发酵容器中所用培养基其配方由如下含量的各组分组成：KH₂PO₄ 1200～1300 mg/L、MgSO₄·7H₂O 950～1050mg/L、EDTA-2Na 450～550 mg/L、H₃BO₃ 110～120 mg/L、CaCl₂·2H₂O 105～120 mg/L、FeSO₄·7H₂O 45～55 mg/L、ZnSO₄·7H₂O 85～90 mg/L、MnCl₂·4H₂O 12～16 mg/L、MoO₃ 6.5～7.5mg/L、CuSO₄·5H₂O 15.5～16 mg/L、(CoNO₃)₂·6H₂O 4.5～5.5 mg/L，培养基中还添加有碳源和氮源，其中所述碳源其在培养基中的含量以使培养基中含有0.03mol/L～0.33mol/L的碳元素为准，所述氮源其在培养基中的含量以使培养基的碳氮比保持在28.4～113.4为准。

3.根据权利要求2所述的培养方法，其特征在于，步骤(2)中，异养发酵容器中所用培养基其配方由如下含量的各组分组成：KH₂PO₄1250 mg/L、MgSO₄·7H₂O 1000 mg/L、EDTA-2Na 500 mg/L、H₃BO₃ 114.2 mg/L、CaCl₂·2H₂O 111 mg/L、FeSO₄·7H₂O 49.8 mg/L、ZnSO₄·7H₂O 88.2 mg/L、MnCl₂·4H₂O 14.2 mg/L、MoO₃ 7.1 mg/L、CuSO₄·5H₂O 15.7 mg/L、(CoNO₃)₂·6H₂O 4.9 mg/L，培养基中还添加有碳源和氮源，其中所述碳源其在培养基中的含量以使培养基中含有0.03～0.33mol/L的碳元素为准，所述氮源其在培养基中的含量以使培养基的碳氮比保持在28.4～113.4为准。

4.根据权利要求2或3所述的培养方法，其特征在于，步骤(2)的培养基中，其添加的氮源为有机氮源或无机氮源，其添加的碳源为有机碳源；步骤(3)中向小球藻培养液中加入的氮源为无机氮源。

5.根据权利要求2或3所述的培养方法，其特征在于，步骤(2)中，所述碳源其在培养基中的含量以使培养基中含有0.25～0.33 mol/L的碳元素为准。

6.根据权利要求1～3任一项所述的培养方法，其特征在于，步骤(2)中，异养发酵容器中所用培养基其碳氮比为28.4～38；步骤(3)中，向小球藻培养液中加入氮源，使小球藻培养液中含有44.1～88.2 mmol/L的氮元素。