[发明专利]一种提高胭脂萝卜胚胎发生率的方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物组织培养技术领域，尤其涉及一种促进胭脂萝卜小孢子胚胎发生的培养方法。

背景技术

胭脂萝卜(Raphanus Sativus L.Sinoruber Makino)是十字花科萝卜属萝卜种下的一个地方品种，其肉质根营养丰富，质地更致密，适宜加工各种萝卜干，同时肉质根皮、心全红，萝卜红色素含量高且色素品质和溶解性均优于其它红萝卜，因此红心萝卜是提取天然食用红色素的理想原料作物，在我国西南地区已有较大的栽培面积。从胭脂萝卜中提取得到的萝卜红色素具有化学稳定性好、贮藏稳定性、耐热性优等特点,此外,它还具有一定的抗氧化性,是对人体有保健功能的着色剂。

目前，生产上使用的胭脂萝卜品种种质资源较少、性状不齐，叶色、叶型、根型杂乱不一；假红心，皮色整齐，肉色以花心为主，普遍混杂白心，部分群体无典型的红心，心皮全红的特色已不显著；色素含量低，鲜产量不高等。亟需广泛收集、整理国内外胭脂萝卜种质资源，利用现代育种技术手段进行提纯复壮，选育出具有心皮全红显著特性的、不同类型的胭脂萝卜自交系育种材料，并配制杂交种，提高资源利用效率。

萝卜杂种优势极明显，传统的多代自交分离亲本自交系的方法一般需要5～6年的时间，而游离小孢子培养方法可以在1～2年内获得单倍体植株，加倍后成为纯合自交系，因此，萝卜小孢子培养技术在优良自交系的创制和提高新品种选育的效率等方面具有重要作用。游离小孢子培养技术在萝卜遗传研究和育种中具有很大的应用潜力。经过多年努力，虽然国内外学者对提高萝卜小孢子胚胎发生频率方面的研究做了大量深入的研究，但与其它十字花科作物相比，其胚状体诱导率和再生率较低，严重阻碍了小孢子培养技术的应用。而在胭脂萝卜育种中，小孢子培养技术没有得到应用。本文在前期研究的基础上，采用胭脂萝卜游离小孢子与青花菜易出胚基因型花药共培养，显著促进胭脂萝卜小孢子胚胎发育，获得了大量再生植株，所需时间较短，操作简便。

发明内容

本发明提供了一种提高胭脂萝卜胚胎发生的培养方法，采用胭脂萝卜与易出胚的青花菜花药按一定数目配比共培养，从而促进胭脂萝卜小孢子出胚，提高小孢子培养的出胚率。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：

一种提高胭脂萝卜胚胎发生率的方法，包括以下步骤：

1)取胭脂萝卜和青花菜花蕾，灭菌；

2)将混合花蕾灭菌后的胭脂萝卜游离小孢子与青花菜花药置于培养液中，经热击后混合培养，诱导获得子叶型胚状体；

3)将子叶型胚状体接种至固体分化培养基中，培养得到再生植株；

4)从再生植株切取再生芽，接入生根培养基，获得完整植株；

所述胭脂萝卜小孢子出胚率差，青花菜易出胚。

所述胭脂萝卜和青花菜的花蕾均处于单核晚期至双核早期。

所述胭脂萝卜和青花菜的花蕾与花药的数量比为1：5～8。

所述胭脂萝卜小孢子与青花菜花药混合液采用32～33℃热击处理1～3天。

所述培养液为NLN-13液体培养基和无菌活性炭混合液的混合物，其中活性炭混合液的组成为：1L NLN液体培养基、2～5g琼脂糖和1g活性炭。

所述的NLN液体培养基，以1L计，组成为：KNO₃125mg，Ca(NO₃)₂·4H₂O 500mg，MgSO₄·7H₂O 125mg，KH₂PO₄ 125mg，H₃BO₃ 6.2mg，MnSO₄·H₂O 18.95mg，ZnSO₄·7H₂O8.6mg，Na₂MoO₄·2H₂O 0.25mg，CuSO₄·5H₂O 0.025mg，CoCl₂·6H₂O 0.025mg，维生素B1 0.5mg，维生素B6 0.5mg，生物素0.05mg，叶酸0.5mg，Na₂EDTA 37.3mg，FeSO₄·7H₂O 27.8mg，肌醇100mg，甘氨酸2mg，烟酸5mg，L-谷氨酰胺800mg，谷胱甘肽30mg，维生素B5 5mg，丝氨酸100mg和余量的无菌水。