[发明专利]一种调节性表达目的基因的载体及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种调节性表达目的基因的载体，其特征在于，所述调节性表达目的基因的载体包含目的基因表达盒，所述目的基因表达盒包含：肝特异性启动子、胆固醇调节元件和目的基因，所述胆固醇调节元件、肝特异性启动子与目的基因可操作地连接。

2.如权利要求1所述的调节性表达目的基因的载体，其特征在于，所述目的基因为蛋白质的编码基因或小分子RNA的编码基因。

3.如权利要求1所述的调节性表达目的基因的载体，其特征在于，所述肝特异性启动子为磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶启动子、α-I-抗胰蛋白酶启动子、甲状腺激素结合球蛋白启动子、α-甲胎蛋白启动子、醇脱氢酶启动子、IGF-II启动子、因子VIII启动子、HBV基础核心蛋白启动子、HBV前s2蛋白启动子、甲状腺素-结合球蛋白启动子、HCR-Ap0CII的杂合启动子、HCR-hAAT杂合启动子、与小鼠白蛋白基因的增强子元件结合的AAT启动子、载脂蛋白E启动子、低密度脂蛋白启动子、丙酮酸激酶启动子、卵磷脂-胆固醇酰基转移酶启动子、载脂蛋白H启动子、铁传递蛋白启动子、甲状腺素运载蛋白启动子、α-纤维蛋白原及β_纤维蛋白原的启动子、α-I-抗糜蛋白酶启动子、α-2-HS糖蛋白启动子、触珠蛋白启动子、血浆铜蓝蛋白启动子、血纤维蛋白溶酶原启动子、补体蛋白启动子、补体C3激活子的启动子、血液结合素启动子及α-I-酸性糖蛋白启动子。

4.如权利要求1所述的调节性表达目的基因的载体，其特征在于，所述胆固醇调节元件为基因的启动子中的顺式作用元件，所述基因包括胆固醇合成途径中或脂肪酸合成途径中酶的编码基因或受体蛋白的编码基因。

5.如权利要求1所述的调节性表达目的基因的载体，其特征在于，所述调节性表达目的基因的载体还包含Kozak序列和肝特异性定位控制元件中的至少一种。

6.如权利要求1所述的调节性表达目的基因的载体，其特征在于，所述调节性表达目的基因的载体不含标准质粒的骨架DNA序列。

7.如权利要求1所述的调节性表达目的基因的载体，其特征在于，所述调节性表达目的基因的载体为微环DNA。

8.一种调节性表达目的基因的载体的制备方法，其特征在于，包括：

将肝特异性启动子、胆固醇调节元件和目的基因插入载体的多克隆位点，得到所述调节性表达目的基因的载体，所述调节性表达目的基因的载体包含目的基因表达盒，所述目的基因表达盒包含：肝特异性启动子、胆固醇调节元件和目的基因，所述胆固醇调节元件、肝特异性启动子与目的基因可操作地连接。

9.如权利要求8所述的调节性表达目的基因的载体的制备方法，其特征在于，所述载体为病毒载体、原核质粒载体或真核质粒载体。

10.如权利要求8所述的调节性表达目的基因的载体的制备方法，其特征在于，所述载体为微环DNA空质粒，所述调节性表达目的基因的载体为微环DNA母质粒，所述微环DNA母质粒经过位点特异性重组后得到不含标准质粒的骨架DNA序列的调节性表达目的基因的载体，所得不含标准质粒的骨架DNA序列的调节性表达目的基因的载体包含目的基因表达盒，所述目的基因表达盒包含：肝特异性启动子、胆固醇调节元件和目的基因，所述胆固醇调节元件、肝特异性启动子与目的基因可操作地连接。

11.如权利要求10所述的调节性表达目的基因的载体的制备方法，其特征在于，所述不含标准质粒的骨架DNA序列的调节性表达目的基因的载体为微环DNA。

12.如权利要求8所述的调节性表达目的基因的载体的制备方法，其特征在于，所述目的基因为蛋白质的编码基因或小分子RNA的编码基因。