[发明专利]一种获得连翘属与六道木叶属属间杂种的方法

权利要求书

1.一种获得连翘属与六道木叶属属间杂种的方法，其特征在于，具体步骤如下：

1)选长花柱的连翘属的连翘为母本，选短花柱的六道木叶属的翅果连翘为父本，进行属间人工杂交，收取杂交后的种子；

2)种植种子获得杂交后代材料，参照父本和母本进行形态学观察统计，并采用AFLP分子标记进行杂种鉴定，选取连翘属与六道木叶属属间杂种。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)所述属间人工杂交，包括如下步骤：

a采集短花柱的六道木叶属翅果连翘的鲜花粉；

b将长花柱的连翘属连翘去雄；

c将步骤a采集的花粉授粉到步骤b连翘属连翘的柱头上并套袋；

d种子发育成熟后采收。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤c所述授粉的时间为上午11-12时，每天1次，重复3次。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤c所述套袋，授粉后套硫酸纸袋，花柱萎蔫后换成网袋。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤d所述采收，为待种子发育成熟后采摘、阴干。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)所述种植种子，具体步骤如下：

种子采用100mg/L赤霉素浸种处理6h后，点播于装有泥炭的穴盘内，覆膜，置于温室，萌发后获得杂交后代材料。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，其中，步骤2)所述进行形态学观察统计，针对茎、叶、枝条、花的表型。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)所述采用AFLP分子标记进行杂种鉴定，所用的引物对为：

E38/M47

上游引物E38：5’-gactgcgtaccaattcact-3’(如SEQ ID No.1所示)

下游引物M47：5’-gatgagtcctgagtaacaa-3’(如SEQ ID No.4所示)

E38/M55

上游引物E38：5’-gactgcgtaccaattcact-3’(如SEQ ID No.1所示)

下游引物M55：5’-gatgagtcctgagtaacga-3’(如SEQ ID No.7所示)

E40/M52

上游引物E40：5’-gactgcgtaccaattcagc-3’(如SEQ ID No.2所示)

下游引物M52：5’-gatgagtcctgagtaaccc-3’(如SEQ ID No.6所示)

和/或E44/M49

上游引物E44：5’-gactgcgtaccaattcatc-3’(如SEQ ID No.3所示)

下游引物M49：5’-gatgagtcctgagtaacag-3’(如SEQ ID No.5所示)。

9.权利要求1-8所述获得连翘属与六道木叶属属间杂种的方法在育种中的应用。

10.用于连翘属与六道木叶属属间杂种AFLP分子标记鉴定的引物对，其为：

E38/M47

上游引物E38：5’-gactgcgtaccaattcact-3’(如SEQ ID No.1所示)

下游引物M47：5’-gatgagtcctgagtaacaa-3’(如SEQ ID No.4所示)

E38/M55

上游引物E38：5’-gactgcgtaccaattcact-3’(如SEQ ID No.1所示)

下游引物M55：5’-gatgagtcctgagtaacga-3’(如SEQ ID No.7所示)

E40/M52

上游引物E40：5’-gactgcgtaccaattcagc-3’(如SEQ ID No.2所示)

下游引物M52：5’-gatgagtcctgagtaaccc-3’(如SEQ ID No.6所示)

和/或E44/M49

上游引物E44：5’-gactgcgtaccaattcatc-3’(如SEQ ID No.3所示)

下游引物M49：5’-gatgagtcctgagtaacag-3’(如SEQ ID No.5所示)。