[发明专利]一种青霉素酰化酶的制备方法在审
| 申请号： | 201410365989.6 | 申请日： | 2014-07-29 |
| 公开（公告）号： | CN104087565A | 公开（公告）日： | 2014-10-08 |
| 发明（设计）人： | 李红飞;刘健;陈英新;徐永龙;梅玉龙;郝金恒;李银;袁国强 | 申请（专利权）人： | 石药集团中诺药业（石家庄）有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/10 | 分类号： | C12N9/10;C12R1/19 |
| 代理公司： | 石家庄元汇专利代理事务所(特殊普通合伙) 13115 | 代理人： | 刘闻铎 |
| 地址： | 050000 *** | 国省代码： | 河北;13 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 青霉素 酰化酶 制备 方法 | ||
1.一种青霉素酰化酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
a.取大肠杆菌，在35-40℃条件下制备一级种子和二级种子，所用种子培养基含有蛋白胨，酵母浸膏，NaCl；
b.将步骤a制备的二级种子接种至发酵培养基中，在35-40℃培养15-30h，得到发酵液，所述发酵培养基含有甘油，酵母粉，蛋白胨，NaCl，微量元素水溶液；
c.将步骤b制备的发酵液进行离心，弃去上清液，收集下层的菌体浓缩液，即得到青霉素酰化酶的粗品溶液；
d.将步骤c所得青霉素酰化酶的粗品溶液进行均质，絮凝，超滤浓缩，沉淀除去杂蛋白，最后进行透析浓缩，即得到青霉素酰化酶纯品。
2.根据权利要求1所述的一种青霉素酰化酶的制备方法，其特征在于，所述步骤a中，在37-38℃条件下制备一级种子和二级种子。
3.根据权利要求1所述的一种青霉素酰化酶的制备方法，其特征在于，所述步骤a中，种子培养基含蛋白胨5-10重量份，酵母浸膏2-5重量份，NaCl5-10重量份，去离子水1000重量份。
4.根据权利要求1所述的一种青霉素酰化酶的制备方法，其特征在于，所述步骤b中，二级种子的接种量为发酵培养基体积的3-9％。
5.根据权利要求4所述的一种青霉素酰化酶的制备方法，其特征在于，所述步骤b中，二级种子的接种量为发酵培养基体积的6％。
6.根据权利要求1所述的一种青霉素酰化酶的制备方法，其特征在于，所述步骤b中，培养的温度为37-38℃。
7.根据权利要求1所述的一种青霉素酰化酶的制备方法，其特征在于，所述步骤b中，培养的时间为26h。
8.根据权利要求1所述的一种青霉素酰化酶的制备方法，其特征在于，所述步骤b中，发酵培养基为每150mL微量元素水溶液中加入甘油10-20g、酵母粉20-30g、蛋白胨10-20g、NaCl 5-10g。
9.根据权利要求1所述的一种青霉素酰化酶的制备方法，其特征在于，所述步骤b中，所述微量元素水溶液的配比为：每升去离子水中含有FeCl3·6 H2O 3.24g，ZnCl20.22g，CoCl2·6H2O 0.24g，NaMoO4·2H2O0.24g，CaCl2·2H2O 0.12g，CuSO4·5H2O 0.20g，H3BO31.0g，MgSO40.74g。
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