[发明专利]一种通用型检测血小板细菌污染的荧光定量PCR方法

权利要求书

1.一种通用型检测血小板细菌污染的荧光定量PCR方法，其特征在于，所述荧光定量PCR方法采用一对检测细菌的通用型引物、一条适用于通用型引物的人工内参、第一条荧光标记的荧光探针和第二条荧光标记的荧光探针，所述两条荧光探针采用不同的荧光标记，所述第一条荧光探针是用于检测细菌的通用型荧光探针，所述第二条荧光探针是用于检测人工内参的内参探针，采用常规的PCR扩增技术进行检测。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述一对检测细菌的通用型引物为CR5-F上游引物和CR7-R下游引物，所述CR5-F上游引物为GTGTAGCIGTGAAATGCGTAGA，所述CR7-R下游引物为TTGCGICCGTAITCCCCAGGCGG，所述第一条荧光探针为CR6-probe 探针，所述CR6-probe 探针为6FAM-CAGGATTAGATACCCTG-BHQ1，扩增产物大小为202 bp。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述一对检测细菌的通用型引物为CR6-F 上游引物和CR8-R 下游引物，所述CR6-F 上游引物为TTAGATACCCTGGTAGTCCA，所述CR8-R 下游引物为GAGCTGACGACAICCITGC，所述第一条荧光探针为CR7-probe 探针，所述CR7-probe 探针为6FAM-ACTCAAAIGAATTGACGG-BHQ1，扩增产物大小为291 bp。

4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述一对检测细菌的通用型引物为CR7-F 上游引物和CR9-R 下游引物，所述CR7-F 上游引物为GCAACGCGAAIAACCTTACC，所述CR9-R 下游引物为TGACGTCITCCCCACCTTC，所述第一条荧光探针为CR8-probe 探针，所述CR8-probe 探针为6FAM-TGAIATGTTGGGTTAAGTCC-BHQ1，扩增产物大小为243 bp。

5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述一对检测细菌的通用型引物为23S3CD-F 上游引物和23S3CD-R 下游引物，所述23S3CD-F 上游引物为CTCAACGGATAAAAGITAC，所述23S3CD-R 下游引物为GACCIAACTGTCTCACGAC，所述第一条荧光探针为23S3CD -probe 探针，所述23S3CD -probe 探针为6FAM-TGTCGGCTCITCICATCCT -BHQ1，扩增产物大小为189 bp。

6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述人工内参采用基因合成方式制备，两端序列和所述一对检测细菌的通用型引物完全匹配，中间80bp的序列和内参探针是人工设计的，与任何细菌及人类基因组没有任何相关性，所述人工内参的结构为5’上游引物序列-人工序列-下游引物互补序列 3’。

7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述人工内参加入到检测样本中，可设为最低检出限或任意阈值，也可作为标准品，具有对检测结果提供质控、判读、定量参照功能。

8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述荧光定量PCR方法中通过反转录荧光定量PCR检测样本中的RNA，与人工内参和相应DNA的Ct值进行比较，判断细菌是否为活性菌。