[发明专利]脱除掌叶半夏病毒的方法

说明书

技术领域

本发明属于作物脱除病毒的方法，特别是指一种脱除掌叶半夏病毒的方法。

背景技术

掌叶半夏(Pinellia pedatisecta Schott)为天南星科半夏属植物，又名虎掌南星，多年生草本。叶片掌状分裂，小叶9-11片，叶柄纤细柔弱，淡绿色，长45～65厘米；肉穗花序顶生，花序柄与叶柄等长或稍长；佛焰苞淡绿色，披针形，下部筒状，长圆形，先端锐尖，长8-14厘米：花单性，无花被，雌雄同株；雄花着生在花序上端，雄蕊密集成圆筒状，长约6毫米，

有香蕉香气；雌花着生在花序下部，贴生于苞片上，长约1.5厘米；花序先端附属物线状，长约9厘米，稍弯曲。浆果卵圆形，绿色，长4-5毫米，径2～3毫米，内含种子1粒。花期6-7月。

掌叶半夏以块茎入药，块茎近球形，类似半夏，但较大，径约3-4厘米，外皮粗糙，褐色，有时尚留有已枯叶柄的基部。剥去外皮为类白色而呈粉状，上部散有细凹点。本品在江苏、河北、河南、山西等地作半夏使用。掌叶半夏块茎供药用，味辛，性平，有毒。能化痰止咳祛风痰、消肿，止痛，治毒蛇咬伤及无名肿毒，治口眼歪斜、半身不遂、破伤风、蛇虫咬伤等。

近年来掌叶半夏人工种植面积不断扩大，但掌叶半夏病毒感染严重，发病面积达90％以上，发病植株叶片扭曲，布满褪绿病斑，为典型的烟草花叶病毒症状；由于存在掌叶半夏田间感病植株高温夏季多发现象，可能同时也感染类病毒，类病毒高温发作，需要低温处理方能脱除。感病植株矮化，生长缓慢，甚至整株死亡，产量和质量大幅度下降。

发明内容

本发明的目的在于提供一种脱除掌叶半夏病毒的方法，以获得掌叶半夏脱毒种苗。

本发明的整体技术方案是：

脱除掌叶半夏病毒的方法，包括如下工艺步骤：

a、低温处理

在自然条件下越冬的掌叶半夏根部覆土3-5厘米，当根部地温在－2℃—3℃时，挖开根部土壤，取掌叶半夏刚刚萌动的芽尖；

b、高温处理

将取下的芽尖涮洗干净，置于铺有湿润滤纸的培养皿中，置到培养箱中进行在温度为50℃，高温处理15分钟；

c、消毒处理

将高温处理过的芽尖用肥皂水涮洗干净，在超净工作台上进行灭菌处理；

d、切取珠芽培养：

将消毒好的芽尖，在超净工作台上，双目实体解剖镜下，解剖针剥取0.3-0.5mm大小的芽尖生长点，接种于诱导培养基进行培养,获得丛生芽或愈伤组织；

e、丛芽培养或诱导

e1、获得的丛生芽可直接转接到第一分化培养基上进行分化培养；

e2、获得的愈伤组织经进一步调控培养，成疏松愈伤组织后，转接到第二分化培养基上诱导培养丛生芽；

f、生根培养

将步骤e中获得的丛生芽经多代分化转接，形成无根组培苗，然后转接到生根培养基上进行生根培养，生成可移栽的瓶苗；

g、二次脱毒

将步骤f中制成的生根瓶苗置于光照培养箱中在38℃高温处理30天，再切取茎尖生长点，培养成植株；

h、植株病毒检测

用酶链免疫吸附法检测步骤g中获得的植株，获得脱除了烟草花叶病毒的掌叶半夏原种苗；

i、炼苗移栽

利用组培快繁技术，对步骤h脱毒的掌叶半夏原种苗进行快速繁育,获得掌叶半夏脱病毒种苗。

本发明的具体工艺步骤和工艺方法还有：

为对掌叶半夏根部形成较好防护，同时便于测量其根部地温，优选的实施方式是，所述的步骤a中在掌叶半夏的根部覆土表面铺设有防护罩，采用地温表测量根部地温。

所述的步骤a中芽尖的长度为0.3-0.5cm。

所述的步骤b中将取下的芽尖用肥皂水涮洗干净。

步骤c中的灭菌处理可以采用多种实现方式，均脱离本发明的技术实质，其中较为常见且优选的实施方式是，所述的步骤c中的灭菌处理是采用酒精溶液将芽尖表面灭菌10－20秒，然后用0.1％升汞溶液灭菌1-3分钟，无菌水冲洗3-5次后用灭菌滤纸吸净芽体表面水分，以备切取珠芽。

所述的步骤d中切取珠芽培养中诱导培养的培养基由下列组分组成：

MS+6-BA1.0mg/kg+IBA0.05mg/kg+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，pH＝5.8；

培养条件是:温度25-28℃，光照2000—3000Lx。