[发明专利]脱除掌叶半夏病毒的方法

权利要求书

1.脱除掌叶半夏病毒的方法，其特征在于包括如下工艺步骤：

a、低温处理

在自然条件下越冬的掌叶半夏根部覆土3-5厘米，当根部地温在－2℃—3℃时，挖开根部土壤，取掌叶半夏刚刚萌动的芽尖；

b、高温处理

将取下的芽尖涮洗干净，置于铺有湿润滤纸的培养皿中，置到培养箱中进行在温度为50℃，高温处理15分钟；

c、消毒处理

将高温处理过的芽尖用肥皂水涮洗干净，在超净工作台上进行灭菌处理；

d、切取珠芽培养：

将消毒好的芽尖，在超净工作台上，双目实体解剖镜下，解剖针剥取0.3-0.5mm大小的芽尖生长点，接种于诱导培养基进行培养,获得丛生芽或愈伤组织；

e、丛芽培养或诱导

e1、获得的丛生芽可直接转接到第一分化培养基上进行分化培养；

e2、获得的愈伤组织经进一步调控培养，成疏松愈伤组织后，转接到第二分化培养基上诱导培养丛生芽；

f、生根培养

将步骤e中获得的丛生芽经多代分化转接，形成无根组培苗，然后转接到生根培养基上进行生根培养，生成可移栽的瓶苗；

g、二次脱毒

将步骤f中制成的生根瓶苗置于光照培养箱中在38℃高温处理30天，再切取茎尖生长点，培养成植株；

h、植株病毒检测

用酶链免疫吸附法检测步骤g中获得的植株，获得脱除了烟草花叶病毒的掌叶半夏原种苗；

i、炼苗移栽

利用组培快繁技术，对步骤h中获得的脱毒掌叶半夏原种苗进行快速繁育,获得掌叶半夏脱病毒种苗。

2.根据权利要求1所述的脱除掌叶半夏病毒的方法，其特征在于所述的步骤a中在掌叶半夏的根部覆土表面铺设有防护罩，采用地温表测量根部地温。

3.根据权利要求1所述的脱除掌叶半夏病毒的方法，其特征在于所述的步骤a中芽尖的长度为0.3-0.5cm。

4.根据权利要求1所述的脱除掌叶半夏病毒的方法，其特征在于所述的步骤b中将取下的芽尖用肥皂水涮洗干净。

5.根据权利要求1所述的脱除掌叶半夏病毒的方法，其特征在于所述的步骤c中的灭菌处理是采用酒精溶液将芽尖表面灭菌10－20秒，然后用0.1％升汞溶液灭菌1-3分钟，无菌水冲洗3-5次后用灭菌滤纸吸净芽体表面水分，以备切取珠芽。

6.根据权利要求1所述的脱除掌叶半夏病毒的方法，其特征在于所述的步骤d中切取珠芽培养中诱导培养的培养基由下列组分组成：

MS+6-BA1.0mg/kg+IBA0.05mg/kg+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，pH＝5.8；

培养条件是:温度25-28℃，光照2000—3000Lx。

7.根据权利要求1所述的脱除掌叶半夏病毒的方法，其特征在于所述的步骤e中第一分化培养基的组成为：MS+6-BA2.5mg/kg+IBA0.1mg/kg+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，pH＝5.8；第二分化培养基的组成为：MS+6-BA2.0mg/kg+IBA0.1mg/kg+蔗糖30g/L+琼脂5g/L。

8.根据权利要求1所述的脱除掌叶半夏病毒的方法，其特征在于所述的步骤f中生根培养基的组成是：1/2MS+NAA1.0mg/kg+蔗糖20g/L，pH＝5.8。